α淀粉酶測定方法的比較

  α-淀粉酶(EC3．2．1．1)測定方法很多，尚難以標準化。碘淀粉比色法、因底物和產物不確定，線性差而不能滿足準確性要求。最近IFCC批準了用亞乙基封閉的G7-pNP作底物的酶偶聯法(EPS法)作為臨時推薦方法，但該法需工具酶，延遲時間長，還不是最理想的參考方法。使用2-氯-4-硝基苯-麥牙三糖(G3-CNP)作底物直接測定淀粉酶也有多篇文獻報道，該法延滯時間較短，CNP的摩爾消光系數不易受pH的影響，C3-CNP法更符合IFCC提出的理想Amy測定方法的條件，但因受內源性葡萄糖昔酶的干擾，而且使用NaN3或KSCN可能導致α-淀粉酶的異構，同時帶來其它一些不利因素，被IFCC拒絕成為參考方法。最近，日本Toyob。公司新底物2-氯-4-硝基苯-o-半乳糖-麥芽糖苷(Cal-G2-α-CNP)，與G3-CNP相比，在非還原性末端用半乳糖代替葡萄糖，從而避免了內源性葡萄糖苷酶的影響。我們對此作了方法學探討。現將報道如下：

       淀粉酶能水解3個葡萄糖單體以上的以α-1，4糖苷鍵相連的麥芽寡糖，Winn Deen等經實驗證實Amy對G3-CUP比G3-pNP的催化速度快10倍，從而使G3-CNP可用為α-淀粉酶的底物。根據IFCC所提出的理想的測定方法條件：要求不使用輔助酶，反應產物具有確定的結構，產物組成恒定等，G3-CNP或Gal-G2-CNP更符合這一要求。Gal-G2-α-CNP的結構式如下：↑所示為淀粉酶作用部位，而α葡萄糖苷酶在此部位無水解作用。

       α-葡萄糖苷酶能水解G≤3的麥芽寡精，但非還原性末端用半乳糖代替后則不能水解，即內源性葡萄苷酶對Gal-G2-α-CNP無水解作用。本文實驗在試劑中加入α葡萄糖苷酶對結果無影響，證明可以避免內源性葡萄苷酶的干擾。由于血清中淀粉酶存在起源于胰腺P和唾液腺S的兩種同工酶，它們對同一底物Km不同。曾對一唾液樣品測定Km，測得Km＝1．44，明顯高于急性胰腺炎血清標本。說明在該系統下測定S型淀粉酶時，底物濃度不足，Emily認為加入154mmol／L的NaN3對兩種同工酶具有相同的激活作用，但NaN3可能對α淀粉酶有異構作用，故本文建議不加入NaN3。考慮價格因素也不增加底物濃度，這樣更能反映淀粉酶對急生胰腺炎的診斷價值。

       本法與EPS法相比，兩者相關良好，測定結果都使用國際單位，但本法結果明顯高于EPS法，也許Gal-G2-α-CNP是淀粉酶更適宜的底物。文獻在其它方法之間對比也如此，因此為了便于測定結果的可比性，在報告單上注明方法是必要的。

       由于淀粉酶測定主要用于急診檢驗，因本法延遲時間短，線性時間長，線性范圍寬，可改為固定時間法，適合于手工操作，也適合于尿液測定。

       總之，本法不需要輔助酶，不受內源性葡萄糖苷酶的干擾，延滯時間短，線性范圍寬，試劑穩定性好，不失為測定淀粉酶的理想方法。