三十五項淘汰臨床檢驗項目、方法及替代實驗(14)

二、血清總三碘甲腺原氨酸(TT₃)測定

(一)原理

　　循環血液中的T₃，一部分來自甲狀腺，大部分(70％一90％)來自T₄的脫碘轉化。絕大部分T₃與血漿TBG結合，僅0.4％處于游離狀態，具有生物活性。T3RIA可直接測定血清主的總三碘甲腺原氨酸(TT₃)，即游離T₃(FT₃)與結合狀態T₃的總和。大多數情況下，TT₃與FT₃相平行，能用以反映甲狀腺功能，甲亢時TT₃升高，甲低時TT₃降低。TT₃的測定同TT₄樣受TBG的影響。

(二)性能

1．了解各類甲狀腺疾病的甲狀腺功能，對早期發現甲亢更有重要意義，是診斷T3甲亢的特異性指標；???

2．用于非甲狀腺疾病中低T₃綜合癥的診斷。

3．可用于對甲亢或甲低病人治療后的隨訪觀察，判斷其預后及治療效果。在藥物治療時，可作為增減藥物或停藥的一項重要參考指標。

(三)操作方法

　　按試劑盒說明書操作。 現以兩種常用的TT3RIA試劑盒為例說明。

第一種：固相TT₃試劑盒，即包被法。

1。試劑盒內容物的準備

(1)總T₃抗體——包被試管：100支T₃抗體包被的聚丙烯試管，包裝在拉鎖袋中。冷存，防潮。打開后要仔細地重新封好。在2—8℃可穩定至袋上所標明的失效期。顏色：粉紅色。

(2)[¹²⁵I]總T₃：一瓶碘標記T₃溶液，內含甲狀腺素結合蛋白的阻斷劑。每瓶105毫升。冷存開封后，在2—8℃可穩定至少30天，或至瓶上所標明的失效期。顏色：紫色。

(3)總T₃標準品：一套六瓶分別標明A至F的標準品溶液，該溶液以處理過的人血清為基質。備用。零標準品有2.0毫升溶液，其余標準品B至F瓶各有1．0毫升。冷存。開蓋后在2—8℃可穩定至少30天。冷凍可延長標準品的使用期。如果有必要，可分瓶以避免反復凍融。???

　　標準品的濃度分別為0、20、50、100、200和600ng／d1，相當于0、0．31、0．77、1．54、3．07和9．22nmol／L。以合適比例混合所給出的標準品溶液，可得到其它濃度的標準品。

2．分析步驟

(1)空白管：成對標號4支空白(未包被)12X 75mm聚丙烯試管：T（總計數)和NSB(非特異結合)。

　　注：因為在該檢測中，非特異結合很低，所以可舍去NSB管，而對結果的準確度沒有影響。

　　包被管：成對標號12支總T₃抗體——包被試管：A（最大結合)、B至F。成對標號其它總T₃抗體——包被試管用以質控和病人樣品的檢測。

(2)向A管和NSB管中，加入100μ1零標準品A。向其它標號試管中寸加入100μl對應的標準品、質控和病人樣品。切記：直接加到試管的底部。

　　注；高值病人樣品應使用零標準品稀釋。

(3)向所有試管中，加入1.0毫升[¹²⁵I]T₃(紫色)。輕輕地振蕩幾下。

　　注：加樣過程不得超過10分鐘。取出總T待計數(見第6 步)。

(4)在37℃溫育120分鐘。

　　注：在水溶中進行。

(5)完全傾去溶液。

　　注：除去所有可見的液殊將大幅度提高精確度。使用泡沫傾倒架，除去所有試管中的內容物，使試管空干2—3分鐘(試管倒置不會損失抗體結合的物質)。然后，在吸水紙上叩擊試管，除去所有的液珠。

(6)計數1分鐘。

3．結果計算

　　為了從logit-log標準曲線上計算T3濃度，首先計算每對試管的1分鐘平均凈計數。

　　凈計數＝平均CPM一平均NSB　CPM

　　然后計算每對試管相對于最大結合(MB)的百分結合率。A管的百分結合率為100％。

　　　　　　　　凈計數
　　凈計數=－－－－－－－－×100%
　　　　　　 　凈MB計數

　　可舍去對非特異結合的校正，使計算簡化，當百分結合率直接由平衡CPM計算時，最后得到的樣品濃度與實際結果相同。

　　使用logit-log坐標紙。以百分結合率為縱坐標，T3濃度為橫坐標，對B到F標準品的檢測結果作圖。標準曲線近似為連結5點的直線，未知樣品的T3濃度通過內插法從這條直線上估算出。

第二種：PEG法TT₃試劑盒。

1.試劑內容及配制

(1)[¹²⁵I]T₃，紅色，3—4dCi／瓶，體積22ml，含有巴比妥緩沖劑、AMS和BSA。直接用于實驗。

(2)抗T₃血清，含有巴比妥緩沖劑和BSA。使用時加入22ml蒸餾水溶解后為蘭色液體，放置10分鐘后使用。

(3) T₃標準品：配制在去T₃血清中。使用時分別加500μI蒸餾水，放置10分鐘并輕輕旋轉瓶子，使其充分溶解后方可用于實驗。T₃含量分另為0、0．5、1．0、2。0、4．0、8．0ng／m1。

(4)PEG：含巴比妥緩沖劑，直接用于實驗。

2．分析步驟

　　加樣及測定程序見表2及其說明：

　　表2 TT₃RIA操作順序表（單位ul）

（1)試管編號；1—2號管為T管，用于測量總計數率，3一14號管分別加入T₃標準溶(濃度為0、0．5、1·0、2．0、4．0、8.0ng／ml各50μ1(標準做雙管)。15號管后加入待測血清50μ1。

(2)各管均加)k1251Ts溶液200~1，混合均勻。

(3)各管(除T管外)均加入抗T，血清溶液200~1，混合均勻，在37℃溫育1小時。

(4)各管(除T管外)均加入PEG溶液500~1，充分混勻后，在離心機上以3500轉／分轉速離心15分鐘。

(5)立即棄去上清液(除T管外)。

(6)測定T管及各管沉淀部分的放射性計數率。

3、結果計算

　　參照PEG法TT₄試劑盒。

4．操作注意事項

　　參照PEG法TT₄試劑盒。

(四)參考值

　　隨所用的試劑盒，實驗室條件及被測對象而異，青壯年處于平衡狀態，50歲以上逐漸下降，70歲以上明顯下降。故必須建立不同年齡組T₃參數值。男女性別對TT₃影響不大。