1.5.5 ELISA法檢測 血清中細胞因子ILK , IFN、的濃度 取全血標本離心20分鐘，取上清液進行檢測，嚴格按eBioscienc;e公司提供的EI1SA試劑盒中的檢測方法測定血清中細胞因子IL 2 ， IFN-r的濃度。用酶標儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
1.5.6形態學觀察 各組小鼠跳臺實驗結束后，立即處死，迅速取腦組織，并在中性福爾馬林溶液中固定，常規石蠟包埋，切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察腦組織神經元細胞形態變化。
2結果
2. 1對D-半乳糖誘導的衰老小鼠跳臺實驗中學習記憶的影響
測試學習能力中，與正常對照組相比，衰老組癡呆小鼠跳上跳臺潛伏期明顯延長，錯誤次數增多，有統計學意義;與衰老組對比，腦復康組和絲瓜提取物375 mg/kg,750mg/kg劑量組癡呆小鼠潛伏期和錯誤次數顯著降低，有顯著差異。在測試記憶能力中，與正常對照組相比，衰老組小鼠跳下跳臺潛伏期明顯縮短，錯誤次數增多，差別有統計學意義。與衰老組對比，腦復康組和絲瓜提取物375 mg/kg,750 mg/kg劑量組小鼠潛伏期明顯延長和錯誤次數顯著降低，有顯著差異。
2. 2瓜提取物對Morris水迷宮中小鼠定位航行實驗及空間探索能力實驗的影響 定位航行實驗中，各組小鼠逃避潛伏期隨著訓練時間的延長逐漸縮短;第2天實驗開始，衰老組較空白組小鼠逃避潛伏期顯著延長，提示小鼠學習記憶功能明顯損傷。第3天實驗開始，與衰老組相比，絲瓜提取物750mg/kg劑量組可顯著縮短癡呆小鼠找到平臺的潛伏期，絲瓜750mg/kg劑量組與腦復康比較實驗5天中逃避潛伏期差異無統計學意義。衰老組與對照組相比，癡呆小鼠在平臺象限的游泳時間明顯縮短，繞平臺所在象限穿越次數減少;與衰老組小鼠相比，絲瓜提取物375 mg / kg, 750mg / kg劑量組及腦復康組明顯延長小鼠在平臺象限的游泳時間，絲瓜提取物各劑量組均不同程度增加癡呆小鼠穿越平臺次數，其中絲瓜提取物750mg/kg劑量及腦復康組與衰老組相比具有顯著性差異。
2. 3瓜提取物對D-半乳糖誘導的衰老小鼠腦、胸腺和脾臟指數的影響與對照組比較，衰老組小鼠腦指數、脾及胸腺指數均顯著減少，腦復康組及絲瓜提取物375 mg/kg,750mg/kg劑
量組小鼠較衰老組小鼠腦指數、脾及胸腺指數顯著增大，沒有顯著的劑量依賴性。
2. 4絲瓜提取物對D伴乳糖致衰老小鼠模型脾T淋巴細胞轉化功能、血清中細胞因子ILK及IFN-r的影響與對照組相比，衰老組小鼠的脾T淋巴細胞轉化刺激指數(SI)降低，差異有顯著性意義。與衰老組相比，腦復康組及絲瓜提取物187. 5mg/kg,375 mg/kg,750mg/kg劑量組均能提高小鼠SI，差異具有統計學意義。與對照組相比，血清中細胞因子ILK與IFN-r，衰老組IL 2,IFN-r明顯降低，有統計學意義;而絲瓜提取物375 mg/kg,750m刻k}劑量組均能升高小鼠血清中ILK和IFN-r，差異具有統計學意義
25小鼠腦組織光學顯微鏡形態學觀蔡正常對照組腦組織細胞形態規則且結構清晰、排列整齊，細胞數口較多，無變性細胞。衰老模型組小鼠腦皮層變薄，腦細胞數量明顯減少，排列紊亂，著色不均勻，部分核固縮，形態發生改變，可見空泡樣變化。與模型組比較，腦復康組及絲瓜提取物375 mg/kg,750mg/kg劑量組雖有輕度的細胞腫脹，但細胞形態結構完整，排列整齊，數量也增多，187.5 mg/kg劑量組有少量的空泡樣變化，絲瓜提取物187.5 mg/kg,375 mg/kg,750mg/kg劑量組小鼠腦組織細胞的數量和排列均明顯得到改善
3討論
衰老是生命過程的一個必經階段，主要表現為機體對環境的適應能力減弱以至喪失，出現多種器官組織功能的衰退。衰老和延緩衰老的研究成為世界各國解決老年問題的熱點前沿
研究衰老和癡呆的動物模型很多，給小鼠注射D-半乳糖已成為常見的模擬衰老動物模型的方法，廣泛用于阿爾茲海默病(AD)等神經退行性疾病的藥理研究[l0} o Morri、水迷宮的定位航行實驗反映小鼠的空間認知能力;空間探索實驗則反映小鼠空間記憶的能力。
結果表明，絲瓜提取物明顯縮短定位航行實驗中小鼠的逃避潛伏期，空間探索實驗中明顯延長小鼠在原平臺所在象限的游泳時間，增加其穿越平臺次數。跳臺實驗屬于被動回避性反射，可以考察藥物對記憶全過程的影響，同時測定藥物對逃避潛伏期和安全平臺期的影響，可以排除藥物非特異性作用的干擾[U i7實驗結果顯示模型組小鼠跳臺實驗中學習前和學習后潛伏期縮短、錯誤次數增加。絲瓜提取物各劑量組延長跳臺實驗中學習前和學習后潛伏期、減少錯誤次數，改善衰老小鼠的學習記憶能力，成績明顯優于模型組。在行為學層而證明了絲瓜提取物可改善記憶的能力。光鏡觀察腦組織形態學顯示，絲瓜提取物187. 5mg/kg,375mg/kg,750mg/kg劑量組小鼠皮層細胞數量明顯增多，細胞結構改善明顯，絲瓜提取物有可能通過維持細胞形態結構，減少腦神經細胞的衰老或凋亡，保護腦功能達到延緩衰老的作用。
衰老的免疫學說認為，免疫器官老化，免疫細胞及細胞因子發生改變，機體的免疫功能逐漸減弱，這些增齡性變化導致機體衰老和死亡率增加[U.. isl。組織器官的重量，特別是腦、胸腺、脾、肝、i i}F9等重要器官的重量變化是反映機體衰老程度的重要指標[Ua.isl胸腺是T淋巴細胞分化成熟的場所。脾臟參與體內的多種免疫功能。老年機體的免疫功能的降低與T細胞的變化關系很大。根據淋巴細胞轉化率的高低，可判斷機體的細胞免疫功能狀態;白介素2 (ILK)和:干擾素(interferon gam-ma } IFN-r)都是主要由活化的T淋巴細胞產生的細胞因子，具有強大的免疫調節作用。IL一具有促進T細胞增殖分化，增強T細胞、NK細胞活性，誘導干擾素生成的作用。IFN-r可增強抗原提呈細胞與T細胞的相互作用，進而增強T細胞輔助抗體產生，可活化巨噬細胞，促進其殺傷病原體和腫瘤的能力，并可活化NK細胞，提高其殺傷能力。ILK和IFN-r水平的高低是機體細胞免疫的重要標志[U sl。本實驗結果顯示模型組小鼠各項免疫指標異常，免疫器官萎縮、功能減退，淋巴細胞轉化能力降低，外周血IL一含量降低，較好地反映了衰老的病理生理特征。絲瓜提取物能提高衰老模型組小鼠脾淋巴細胞轉化刺激指數，升高血清中ILK和IFN-r濃度水平，能顯著增強衰老小鼠細胞免疫功能。
綜上，絲瓜提取物可以改善衰老小鼠的記憶功能及保護細胞結構功能，有保護免疫器官、提高血清中IL一和IFN、的水平及T淋巴細胞的增殖活性作用，并可能通過增強機體體液和細胞兔疫功能而起到延緩衰老的作用。