桔青霉素是青霉屬、曲霉屬、紅曲霉屬中的絲狀霉菌代謝產生的一種真菌毒素，有研究表明，桔青霉素可造成人和動物腎臟、肝臟、腸道和生殖系統的損傷，甚至還可以導致畸形、腫瘤，誘發突變[1,2,3]。《中國藥典》9305中藥中真菌毒素測定指導 原則（第一次）征求稿[4]中提到中藥材在種植、加工、儲存及流通等過程中存在被真菌及其產生的毒素污染的風險，為實現對中藥中真菌毒素的準確測定，制定本指導原則。除已收錄入2020年版《中國藥典》2351真菌毒素測定法中的7類11種真菌毒素測定法外，該指導原則其中一項，增訂桔青毒素高效液相色譜法與液相色譜串聯-質譜法兩種檢測方法。
SCIEX已針對桔青毒素高效液相串聯質譜法建立液質方法和前處理方法，為中藥中桔青毒素檢測提供參考。
實驗方法特點及優勢
本方法采用SCIEX Triple Quad? 5500+系統，采用桔青霉素免疫親和柱對中藥進行前處理，結合Phenomenex Luna Omega Polar C18色譜柱，建立8 min 色譜梯度，實現高通量定量分析。滿足藥典對回收率的要求；不同濃度回收率結果一致，且儀器的重復性好；前處理流程簡單易操作。
圖1. ExionLC? 2.0系統和本土化SCIEX LC-MS/MS系統
空白溶劑中兩個MRM離子通道均無干擾，方法專屬性好，特異性高，儀器靈敏度高。該色譜條件下，色譜峰峰形良好。
圖2. 典型色譜圖（從左到右，分別為空白溶劑、0.02 ng/mL和20 ng/mL基質加標樣品；上、下兩張譜圖分別為定量和定性離子對通道）
不同濃度的峰面積及線性回歸方程見圖3：0.02 ~20 ng/mL的濃度范圍內，該方法線性關系良好
圖3. 標準曲線和線性回歸方程，線性相關系數 0.9998
6 針樣品 (圖4) 連續采集，精密度（RSD）遠滿足方法學中對重復性要求，儀器和方法的重現性好。
三個不同濃度的提取回收率在91-105%之間，9份提取回收率結果RSD為5.30%，不同濃度的提取回收率結果基本一致，且滿足方法學要求。
結論
本方法采用桔青霉素免疫親和柱對中藥中的桔青霉素進行提取，使用本土化SCIEX Triple Quad? 5500+系統進行定量。
該方法中空白溶劑無干擾，專屬性好，特異性高；
儀器靈敏度高；
線性范圍寬，線性關系良好；
儀器和方法的重現性和穩定性好；
8分鐘梯度方法，檢測通量高。
前處理流程簡單，易操作。
該方案中包含的液質條件和前處理方法，為中藥中桔青霉素的定量提供參考。
參 考 文 獻
1. Frank HK. Citrinin. Z Ernaehrungswiss, 1992,31(3):164
2. Blanc PJ, Loret MO, Goma G. Production of citrinin by various species of Monasucus. Biotechnol Lett, 1995,17(3):291
3. LI Yan, QIU Feng, etc. LC-MS/MS determination of citrinin in traditional Chinese Medicines. Chin J Pharm Anal 2011,31(9)
4. 附件 2：9305 中藥中真菌毒素測定指導原則（第一次）