中藥材黃曲霉素檢測技術概述（二）

5. 高效液相色譜分析

（二）酶聯免疫法

特點

Pribolab(普瑞邦)推出的PriboFast^R黃曲霉毒素總量試劑盒具有較高的靈敏度和準確度，適用于大量樣本的定量分析。

1. 方法原理

采用直接競爭酶聯免疫法，在微孔板上預包被黃曲霉毒素抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素特異抗體。樣本或標準品溶液中的抗原與預包被在板孔上的抗原競爭結合酶標抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣品吸光值與其所含黃曲霉毒素總量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣品中黃曲霉毒素總量的含量。

2. 設備和試劑配置：

3. 樣本前處理：中藥材：粉碎、提取、離心，取上清液加入PriboSpin離心小柱進行凈化。

為什么要用PriboSpin離心小柱？中藥材的基質復雜，提取時樣本液顏色較深，而且不容易去除。有機試劑提取凈化方法繁瑣，試劑揮發對環境及人體造成危害，且凈化效果不穩定。用PriboSpin離心小柱，則只需提取液離心過柱，即可去除提取液中的雜質，方便快捷，凈化效果好，且回收率可以達到85%以上。

4. 檢測步驟

4.1 免疫反應30min；洗板5次；顯色反應30min；終止反應，酶標儀讀OD值。

5. 分析結果的表述

用酶標儀判讀結果。

（三）免疫金標快速檢測法

特點

Pribolab(普瑞邦)推出的PriboStrip^TM黃曲霉毒素總量免疫金標快速檢測條特異性好，適用于檢測樣本量大；短時間出具檢測結果并控制經費的情況，可以快速定性，初篩。

1. 方法原理

黃曲霉毒素總量快速檢測條應用了競爭抑制免疫層析的原理，樣本中的黃曲霉毒素總量在酶標孔中與膠體金標記的特異性抗黃曲霉毒素單克隆抗體結合，抑制了抗體和NC膜檢測線上AF－BSA偶聯物的結合。如果樣本中黃曲霉素總含量大于0.5 ug/L，檢測線不顯顏色，結果為陽性；反之，檢測線顯紅色，結果為陰性。

2.   設備和試劑配置

3.   分析步驟：中藥材粉碎溶解后取上清液檢測。吸取樣品滴加到加樣孔中，8-15分鐘讀取結果。在C線顯色的情況下：T 線顯色比C線深或一樣深是陰性。T 線顯色比C線淺，或無顯色是陽性結果。

五、 溫馨TIPS：

1. 中藥中真菌生長繁殖的有利條件主要是適宜的溫度與水分。如能將中藥貯存于10℃以下，水分保持在10％以下，就能有效地防霉。

2. 從事真菌毒素科研及檢測的人員，必須注意防護，如穿戴隔離衣帽，在進行真菌分離培養工作時，應戴口罩，并盡量防止孢子飛揚。

3. 操作臺面如有漏濺，應立即用新配的5％次氯酸鈉消毒。以5％次氯酸鈉（NaOCl）處理時，黃曲霉毒素于數秒鐘內即被破壞，故是常用的消毒劑。

4. 也有應用生物學方法解毒的報道，生物學方法成本低，收效大，可能是一種有前途的除毒措施。

鑒于霉菌毒素對人體的危害，提醒各位奮斗在抗毒一線的老師們一定要注意保護自身安全哦！

關于Pribolab?（普瑞邦）

Pribolab?（普瑞邦）是面向全球提供霉菌毒素檢測解決方案的主要服務商之一，憑借強大的研發團隊和專業的霉菌毒素檢測技術的研究，為全球農業生產、食品加工與糧食、飼料工業等行業提供專業的霉菌毒素檢測技術與產品服務，同時為社會提供食品、飼料及飲料等的霉菌毒素、食品成分等檢測分析。