摘要：目的 研究中藥藥對虎杖-桂枝對急性痛風性關節炎的影響。方法 取雄性 SD 大鼠 48 只，隨機分為 6組（每組 8 只），即正常對照組，模型組，秋水仙堿組（0.1 g·kg-）1，虎杖-桂枝低、中、高劑量組（3.5，7，14 g·kg-）1。正常對照組和模型組給予等量生理鹽水，其他各組給予相應藥物灌胃，每天 1 次，連續 7 d。于灌胃的第 4 天.模型組與各給藥組大鼠右后踝關節注射 25 mg·mL-1 尿酸鈉（MSU）0.2 mL 1 次，正常對照組給予同量的生理鹽 水，觀察各組大鼠不同時間點足趾容積的變化；第 7 天灌胃 1 h 后取血，ELISA 法測定血清白細胞介素 1β（IL-1β）、轉化生長因子-β（TGF-β）含量，熒光定量 PCR 檢測外周血單核細胞 Toll 受體 2（TLR2）、Toll 受體 4（TLR4）及髓樣分化因子 88（MyD88）的表達。取血后處死動物，取右后踝關節進行病理學觀察。結果 與模型 組比較，在造模后 2 h 和 6 h 虎杖-桂枝藥低、中劑量組可顯著減小大鼠足趾容積率，48 h 和 72 h 虎杖-桂枝 藥對低、中、高劑量組大鼠足趾容積均顯著減小，差異有統計學意義（P ＜ 0.05）。虎杖-桂枝藥對各劑量組可不 同程度的減少關節滑膜炎癥細胞浸潤反應和血管充血程度。與模型組比較，虎杖-桂枝藥對各劑量組可顯著減 少 IL-1β 的含量，抑制 TLR2、TLR4 及 MyD88 基因的表達（P ＜ 0.01）。結論 虎杖-桂枝藥對低、中、高劑量 組對急性痛風性關節炎大鼠具有顯著的改善作用，其機制可能是通過影響血中 IL-1β 的水平，下調 TLR2、 TLR4、MyD88 基因的表達來發揮作用。
關鍵詞：虎杖-桂枝藥對；痛風性關節炎；TLRs/MyD88 通路；大鼠急性痛風性關節炎是由血液尿酸增高，尿酸鈉（MSU）結晶沉積于關節滑膜及周圍組織而引起的急性炎癥反應 [1]。臨床治療痛風的藥物主要為化學藥，長期使用具有較大的副作用，中藥長期使用毒副作用小，具有顯著優勢。既往研]表明，含有虎杖的復方對痛風具有明顯療效；桂枝及其提取物能拮抗多種急、慢性炎癥反應，具有顯著的抗炎作用。
本課題組 前期研究[3]發現，藥對虎杖 - 桂枝對急性痛風性關節 炎具有顯著的改善作用，但其作用機制仍未闡明。 MSU 晶體作為一種危險信號被細胞表面和胞質的模 式識別受體，如 Toll 受體 2 （TLR2）、Toll 受體 4 （TLR4）、CD14 等分子所識別，TLR2/TLR4 與病原 相關分子模型（PAMPs）結合后，其本身結構發生二 聚化，活化髓樣分化因子 88 （MyD88）， 活化后的 MyD88 經過一系列的作用最終激活核轉錄因子 kappa B（NF-κB）以及后續白細胞介素 1β（IL-1β）的釋放。 國內外研究[表明， 痛風出現的炎癥發病機制與 TLRS/MyD88 信號轉導通路密切相關。本研究通過建 立急性痛風性關節炎大鼠模型，探討藥對虎杖 - 桂 枝對急性性痛風性關節炎及 TLRS/MyD88 信號的影 響。
1 材料與方法
1.1 動物 SD 大鼠，雄性，SPF 級，體質量（200±20）g，廣東省動物中心提供，動物許可證號：SCXK （粵）2008-0002。
1.2 藥品及試劑 秋水仙堿，西雙版納藥業有限責任 公司，批號：130313；尿酸鈉，Sigma 公司，批號： BCBH7155V；虎杖、桂枝均購自康美藥業，經本院 中藥鑒定教研室李忠教授鑒定為真品。取虎杖、桂枝， 分別加 10 倍水， 浸泡 30 min， 虎杖煎煮 25 min，桂枝后下煎煮 20 min，過濾；藥渣加 5 倍水， 煎煮 40 min，合并濾液，離心，上清液濃縮，定容， 滅菌，冷藏備用。MSU 溶液參考文獻[2]方法制備。大鼠外周血淋巴細胞分離液，天津市灝洋生物制品科技 有限責任公司， 批號： LTS1083； Trizolf， 美國 intrivogen 公司，批號：15596-026。RNA 逆轉錄試劑 盒，Premix TapTM，SYBR Premix Ex TapTM Ⅱ ， 均為 寶生物工程（大連）有限（Takara）公司產品，批號分 別為：RR047A、RR901A、RR820A；白細胞介素 1β （IL-1β）和腫瘤壞死因子-β （TGF-β） Elisa 試劑盒， 均為美國昂飛公司（eBioscience）產品， 批號分別為 BMS630 和BMS623。
1.3 儀器 YLS-7C 足趾容積測量儀，北京眾實迪創 科技發展有限責任公司；NanoDrop 2000c 型紫外分光 光度計、MuLTiskan Go 型酶標儀， 美國賽默飛 （Thermo）公司；Mastercycler 型 PCR 擴增儀，德國艾 本德（eppendorf）公司；DOLPHIN-1D 型凝膠成像分析 儀，美國威泰克（Wealtec）公司；VIIA7 型熒光定量 PCR 儀，美國應用生物系統（ABI）公司。
