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  • 發布時間:2019-05-12 22:23 原文鏈接: 為陰道毛滴蟲開發的LAMP測定

    一種環介導恒溫擴增(LAMP)測定產品靶向重復的DNA品種特異的序列,其設計用途是檢測陰道毛滴蟲。

    陰道毛滴蟲感染最常用的診斷化驗有:濕片顯微鏡檢、培養和最近使用生殖道拭子、尿液樣本或精液樣本的核酸擴增檢驗(NAAT)。培養是診斷陰道毛滴蟲的金標準,盡管其靈敏度可能和顯微鏡檢一樣低,需要至少孵育一周且每天做顯微鏡檢才能達到最佳效果。

    圖片:一只陰道毛滴蟲滋養體的掃描電子顯微圖像(SEM)(圖片蒙Dennis Kunkel博士惠賜)。

    圖片:一只陰道毛滴蟲滋養體的掃描電子顯微圖像(SEM)(圖片蒙Dennis Kunkel博士惠賜)。

    位于馬尼拉的菲律賓大學的寄生蟲學家收集了16份生殖道拭子和兩份尿樣,樣本來自前來生殖健康中心就診的婦女。通過離心制成對數中期無菌陰道毛滴蟲培養物(107毛滴蟲/毫升)和1毫升等分的臨床樣本。通過聚合酶鏈反應(PCR)檢查所有樣本,看是否存在陰道毛滴蟲。

    基于高度重復的兩千堿基對(2-Kbp)陰道毛滴蟲DNA片段設計特異于陰道毛滴蟲的LAMP引物。用凝膠電泳評估LAMP產物的濁度,并加入英杰公司(Carlsbad, CA, USA)的SYBR Safe DNA凝膠染料,在UVP公司(Upland, CA, USA)的紫外透照器下顯像。自然光下顏色從橙色變成粉紅或者在紫外透照器下從暗色變成熒光信號表示陽性反應。

    16份生殖道拭子樣本中的15份PCR結果為陰性,兩份尿液樣本結果也為陰性。把所有的陰性樣本混為一體,用于做分析靈敏度評估時摻雜。摻雜的生殖道拭子樣本的結果說明LAMP方法的檢測限是100毛滴蟲/毫升,采用的手段是凝膠電泳、濁度或加入SYBR Safe,而PCR的檢測限是103毛滴蟲/毫升。陰道毛滴蟲LAMP與口腔毛滴蟲和人五毛滴蟲等密切相關的毛滴蟲以及溶組織內阿米巴、白色念珠菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌等其它腸道微生物和泌尿生殖道微生物的DNA提取物不發生交叉反應。

    該研究的論文發表于2014年7月號的《診斷微生物學與傳染病》(Diagnostic Microbiology and Infectious Disease)雜志。作者總結說,陰道毛滴蟲LAMP測定是檢測最常見的可治愈性傳播感染——毛滴蟲病的簡單、快速、靈敏且特異的方法。這一高效而經濟的NAAT極其有望準確診斷和大規模監控、篩查和控制護理點和資源有限場合的毛滴蟲病。


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