全球60 億人口中, 約1/2 人口生活在乙肝病毒(HBV ) 高流行區, 約20 億人證明有HBV 感染, 3～4 億人為HBV 慢性感染, 每年約有100 萬人死于HBV 感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發性肝細胞癌(HCC)。2005 年12 月10 日中華醫學會肝病學分會和中華醫學會感染學分會, 中國肝炎防治基金會聯合發布我國首部《慢性乙型肝炎防治指南》, 作為診治乙肝規范性的行動指南。目前國內檢測HBV感染血清學標志物應用較多的仍是ELISA 方法。其有以下缺點: 無法定量、靈敏度低, 由檢測原理帶來的前帶現象無法解決, 易污染, 無法完成HBV 感染的動態觀察以及低水平HBV 感染指標檢測; 免疫膠體金檢測技術可大大縮短檢測時間, 不需要特殊設備, 操作簡單, 但靈敏度欠佳, 假陽性問題難以克服。 隨著科學技術的飛速發展, 先進診斷技術不斷出現, 時間分辨熒光免疫分析技術(TRF IA ) 是近年發展起來的無環境污染的高靈敏度免疫標記檢測技術。乙肝作為常見病毒感染性疾病之一, 臨床上常用ELISA 法定性檢測乙肝病毒血清學標志物作為診斷HBV 是否感染的依據, 由于鉤狀效應和敏感性的原因, 常造成HBV 感染的漏診。臨床實踐表明, TRF IA 法定量檢測乙肝病毒五項血清標志物對乙肝診治的臨床應用越來越顯示出其優越性。 1.材料和方法 1.1 標本來源 收集2004年6 月～2005年9月在我院門診和病房就診患者血清標本920份,并分別定量和定性檢測HBV 血清免疫學標志的全部結果。所有患者均采集靜脈血,于當日分離血清, -70℃保存, 并于1 w 內檢測。 1.2 試劑 上海新波生物技術有限公司生產的HBsAg, 抗-HBs, HBeAg, 抗-HBe 和抗-HBc 定量檢測試劑盒, 批號為20050720; 北京萬泰有限公司生產的ELISA 法定性試劑盒, 批號為B20050101;衛生部臨檢中心提供的乙肝病毒血清學標志物質控品, 批號20050521。 1.3 儀器 Anytest2000 型時間分辨熒光免疫分析儀,DYNEX-MRX 型酶標儀。 1.4 方法 乙肝病毒血清學標志物定量的TRF IA 法和定性的ELISA 法檢測, 均嚴格按照試劑盒各自說明書和《全國臨床檢驗操作規程》中的要求, 兩種方法同時分別對不同濃度的標準品和臨床標本進行檢測。 1.5 結果判定 ELISA 法定性結果參照試劑說明書中的判定方法, 經過本室嚴格檢測, TRF IA 法檢測的不同濃度標準品對應ELISA 法定性檢測的結果為: 以HBsAg≥1.0 ng/ml, 抗-HB s≥10 mIU/ml, HBeAg ≥0.5 NCU/ml, 抗-HBe≥4.0 NCU/ml, 抗-HBc≥0.6 NCU/ml 判定為陽性, 反之為陰性, 見表1。 1.6 統計學分析 用Excel管理數據庫和SPSS11.0 軟件統計分析, 方法學間數據比較用χ2檢驗。 2.結果 2.1 分別用TRF IA 法和ELISA 法對920 份臨床血清標本進行檢測, 參照表1 中判定乙肝病毒五項血清學標志物定量的陰陽性的方法,所有標本均經AXSYM免疫分析儀微粒子酶免分析法檢測HBV感染血清學標志物驗證(此驗證方法目前是公認的診斷HBV 感染的血清學方法) , 結果對比如表2。
2.2 TRF IA法的敏感性: 對0.2 ng/ml HBsAg,10 mIU/ml 抗-HBs, 0. 05 NCU/ml HBeAg, 2 NCU/ml 抗-HBe和0.2 NCU/ml 抗-HBc標準樣品TRF IA法均可檢出, 而ELISA法除抗-HBs為±外, 其余均未檢出。