實驗方法原理
ATP:乙酸磷酸轉移酯(AK)
乙酸+ATP→乙酰磷酸+ADP
這個反應可以與丙酮酸激酶(PK)偶聯,乳酸脫氫酶(LDH)反應如下:
實驗材料 酶樣品
試劑、試劑盒 三乙醇胺-HCl KOH乙酸鈉ATPMgCl2磷酸烯醇式丙酮酸LDHPK
儀器、耗材 分光光度計
實驗步驟
實驗所需「試劑」具體見「其他」
0.98 ml 實驗混合物
0.02 ml 酶樣品
25 ℃ 時,于 340 nm 處吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事項
其他
試劑:
0.1 mol/L 三乙醇胺-HCl/KOH,pH 7.6(三乙醇胺-HCl,用 1 mol/L KOH 調節 pH 7.6)
2 mol/L 乙酸鈉(Mr=82.0;16.4 g 溶于 100 ml 水中)
0.1 mol/L ATP(二鈉鹽,三水合物,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L MgCl2(六水合物,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L 磷酸烯醇式丙酮酸(PEP,三環己基銨鹽,Mr=465.6;46 mg/10 ml)
LDH,20 mg/ml,約 500 U/mg
PK,10 mg/ml,500 U/mg