二氫硫辛酰胺乙酰基轉移酶實驗——Stopped實驗

酶樣品

Tris-HClCoA乙酰磷酸磷酸轉乙酰酶DL-二氫硫辛酰胺HCl羥胺FeCl3 試劑

實驗所需「試劑」具體見「其他」

0.98 ml 實驗混合物

0.02 ml 酶樣品

30 ℃ 培養 15 min，加入 0.1 ml 1 mol/L HCl 停止，沸水浴 5 min。而后 0.4 ml 的測定用量溶于 0.2 ml 2 mol/L 羥胺，并且室溫下持續 10 min 后加入0.6 ml FeCl3 試劑。離心 5 min后測量 546 nm 吸收值。

試劑：

0.1 mol/L Tris-HCl，pH 7.6

0.01 mol/L CoA（游離酸，Mr＝767.5，CoA·Li₃，Mr＝785.4；23 mg 溶于 3 ml 水中）

1 mol/L 乙酰磷酸（LiK 鹽，Mr＝184.1；1.84 mg 溶于 10 ml 水中）

磷酸轉乙酰酶（乙酰-CoA：正磷酸轉乙酰酶，4000 U/ml）

0.2 mol/L DL-二氫硫辛酰胺

1 mol/L HCl

2 mol/L 羥胺（等量的 4 mol/L 羥胺，Mr＝69.49 和 4 mol/L KOH，Mr＝56.11混合）

FeCl₃ 試劑

100 ml 5％ FeCl₃（8.33 g FeCl₃·6H₂O，Mr＝270.3，用 0.1 mol/L HCl 補充至 100 ml）

100 ml 12％ TCA（三氯乙酸，Mr＝163.4）

100 ml 3mol/l HCl（1：3 的比例混合 HCl 和 H₂O）

將三種溶液混合