亞細胞結構分離的技術

分離亞細胞組分的第一步是制備組織勻漿或細胞勻漿。勻漿（Homogenization）是在低溫條件下，將組織或細胞放在勻漿器中加入等滲勻漿介質（即0.25moL/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液）研磨，使細胞被機械地研碎成為各種亞細胞組分和包含物的混合物。

分離亞細胞組分的第一步是分級分離。它通過由低速到高速離心技術，使非均一混合體中的顆粒按其大小輕重分批沉降到離心管的不同部位，再分部收集，即可得到各種亞細胞組分。由于樣品中各種大小和密度不同的顆粒在離心開始時是均勻分布于整個離心管中，故每級分離得到的第一次沉淀必然不是純的最重的顆粒，須經反復懸浮和離心加以純化。分離亞細胞組分主要離心技術是差速離心和密度梯度離心。

差速離心（differential centrifugation）是在密度均一的介質中由低速到高速逐級離心，用于分離不同大小的細胞和細胞器。 在差速離心中細胞器沉降的順序依次為：細胞核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高爾基體、最后為核糖體。由于各種細胞器在大小和密度上相互重疊，一般重復2～3次效果會好一些。通過差速離心可將細胞器初步分離，但常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。

密度梯度離心（density gradient centrifugation） 是用一定的介質在離心管內形成一連續或不連續的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質的頂部，通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降兩種。密度梯度離心常用的介質為氯化銫，蔗糖和多聚蔗糖。分離活細胞的介質要求：能產生密度梯度，且密度高時，粘度不高； pH中性或易調為中性；濃度大時滲透壓不大；對細胞無毒。①速度沉降（velocity sedimentation）主要用于分離密度相近而大小不等的細胞或細胞器。這種方法所采用的介質密度較低，介質的最大密度應小于被分離生物顆粒的最小密度。生物顆粒（細胞或細器）在十分平緩的密度梯度介質中按各自的沉降系數以不同的速度沉降而達到分離；②等密度沉降（isopycnic sedimentation）適用于分離密度不等的顆粒。細胞或細胞器在連續梯度的介質中經足夠大離心力和足夠長時間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質處，并停留在那里達到平衡，從而將不同密度的細胞或細胞器分離。 等密度沉降通常在較高密度的介質中進行。介質的最高密度應大于被分離組分的最大密度。再者，這種方法所需要的力場通常比速度沉降法大10~100倍，故往往需要高速或超速離心，離心時間也較長。大的離心力、長的離心時間都對細胞不利。因此，這種方法適于分離細胞器，而不太適于分離和純化細胞。

分離亞細胞組分的第三步是對分級分離得到的組分進行分析，以確認。常要的分析方法包括形態和功能鑒定。