1. 1：2000 的舊結核菌素吸入蘭心注射器內。2. 前臂屈側皮膚消毒后，皮內注射舊結核菌素0.1ml，在局部形成一個明顯的皮丘。3. 48～72 h觀察注射局部有無紅腫，硬結。若硬結直徑超過0.5 cm 時，即為結核菌試驗陽性，硬結小于0.5 cm 為陰性，硬結超過1.5 cm 以上或發生水泡，淋巴管炎及全身中毒反應者為強陽性。4. 記錄并判定結核菌素試驗結果。
OT試驗陽性反應表明機體對結核菌蛋白有超敏反應，間接說明對結核桿菌有一定的細胞免疫力，但對成人來說并不表明發病。三歲以下兒童結核菌素試驗陽性則可認為體內可能有活動性感染，應進一步檢查。陰性反應常見于下列情況：（l）機體未感染過結核，也未接種過卡介苗；（2）原發感染早期，機體尚未產生超敏反應；（3）機體抵抗力極度低下，已喪失反應能力，如全身粟粒型結核，結核性腦膜炎；麻疹，腫瘤等OT試驗往往陰轉；（4）大量，長時間使用免疫抑制劑；（5）接種卡介苗已多年或試驗的結核菌失效。
