原理:
此法采用定量夾心酶聯免疫技術。抗體具體為BIRC5已經被預先涂到微孔板。標準和樣品吸入井和任何BIRC5目前被綁定的固定化抗體。生物素共軛的抗體特異性BIRC5除去任何未結合的物質后,加入到孔中。抗生物素蛋白共軛的辣根過氧化物酶(HRP)的洗滌后,加入到孔中。經過洗滌,以除去任何未結合的抗生物素蛋白的酶試劑,底物溶液加入到孔中,顯色成比例的量的初始步驟中的約束的BIRC5。彩色顯影被停止并測量的顏色的強度。
計算結果:
建議使用專業的軟“曲線專家1.3"的標準曲線
平均每個標準和樣品的重復讀數和平均減去零標準的光學密度。
標準曲線,通過減少使用能產生四參數邏輯(4-PL)的曲線擬合的計算機軟件的數據。作為一種替代方法,建立標準曲線,對在y-軸的濃度通過繪制在x-軸為每個標準的平均吸光度,并繪制一個通過在曲線圖上的點的最佳擬合曲線。該數據可以通過繪制的BIRC5濃度與日志的OD值和最佳擬合直線的日志,可以通過回歸分析確定線性化。此過程會產生足夠的,但不太的適合的數據。
樣品采集和存儲:
血清:使用血清分離管(SST)和全血標本在室溫下兩小時或4℃過夜℃,然后離心15分鐘,在1000×g下。刪除上清即可檢測,或分裝和店內樣品在-20°C或-80°C。但應避免反復凍融循環。
等離子:采集血漿中EDTA或肝素作為抗凝血劑。在2-8°C在30分鐘內收集離心15分鐘,1000×G。即可檢測,或分裝保存樣本在-20°C或-80°C。但應避免反復凍融循環。