實驗方法原理 以反復接種傳代于裸鼠皮下的SGC-7901 人胃癌細胞株建立的移植瘤組織塊為材料，將其用生物吻合OB膠原位粘貼于裸鼠胃壁，并與傳統"胃囊法"、”皮下移植法“比較觀察移植腫瘤的生長情況、移植成功率和自發轉移的發生率。
實驗材料 BALB c 無胸腺裸鼠傳代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌細胞株
試劑、試劑盒 氯胺酮胎牛血清 RPMI-1640培養基干粉秋水仙素甲醇冰醋酸Giemsa染液伊紅染液
儀器、耗材 醫用OB吻合膠高速冷凍離心機普通光學顯微鏡多功能倒置相差顯微鏡生物攝影顯微鏡
實驗步驟
一、實驗材料準備
6周齡BALB/c 無胸腺裸鼠24只，雌雄兼用，體重18-20 g。傳代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌細胞株，本實驗腫瘤組織為第6代。
二、人胃癌SGC-7901組織塊制備
1. 無菌條件下取人胃腺癌SGC-7901J標本中的組織數塊， 直徑約0.5-1.0 cm，去除壞死組織，漂洗，濾紙吸干后置RPMI-1640液中剪成1-2 mm 的小塊， 制備成單細胞懸液（5×108- 2.5×1011 / L）。
2. 置于18號套管針針口， 碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接種， 逐日觀察，待腫瘤長至1.0-1.5 cm時處死裸鼠，取出腫瘤組織按上述方法傳代， 傳代瘤鼠與實驗用鼠同為BALB/c無胸腺裸鼠，本組瘤源為第6代。
三、模型的建立
1. 將24只健康裸鼠隨機分為3 組，即皮下移植組、胃囊法組和OB膠粘貼組，每組8只。
2. 將傳代瘤鼠拉頸處死，無菌操作，從腋部皮下剝取腫瘤組織，剔除纖維包膜，切開選取生長良好、呈淡紅色、魚肉狀的瘤組織， 切成1 mm ×1 mm×1 mm小塊，置于生理鹽水中備用。
3. 皮下移植組：將切好的瘤塊置于18號套管針針口，碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接種。
4. 胃囊法組：腹腔注射50 mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，無菌條件下沿左側正中旁線切開，刀口約1.5 cm，小心暴露腹膜、胃壁，在胃壁縫制粘膜小囊，將腫瘤組織塊包埋于其中，縫合關腹。
5. OB膠粘貼組：腹腔注射50 mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，常規消毒皮膚，沿左側正中旁線切開，刀口約1.5 cm處小心暴露腹膜、胃壁，用一次性注射針頭輕微損傷胃大彎中部漿肌層，以出血為度，將腫瘤組織用醫用吻合OB膠粘合在破損處，用0號線縫合腹膜腹壁，關腹。
四、處死動物及觀察移植瘤轉移情況
1. 12 周后，裸鼠出現消瘦、 活動受限、倦呆乏力等衰竭癥狀，部分裸鼠瘤體突出至皮下，呈蛙形腹，將裸鼠拉頸處死，肉眼觀察8 組移植瘤的局部生長、腹水、鄰近淋巴結以及遠處臟器轉移情況。
2. 解剖動物，全面探查胸腹腔，取出原位移植瘤、腫大淋結、肝、脾、胰、肺，并測量各組移植瘤的體積，同時用電子天平稱取瘤重。
3. 標本用10%甲醛固定、切片、染色后進行病理組織學檢查。
五、人胃腺癌SGC-7901細胞染色體標本制備
1. 在無菌條件下，剪取部分原位移植瘤組織，放于無血清RPMI-1640培養液中，進行原代細胞培養。
2. 待細胞生長旺盛并長成單層時即可進行第一次傳代，并制作染色體標本。
3. 在40倍光鏡下觀察，并用顯微攝影機攝下一個細胞染色體的中期分裂相。
六、統計學方法
所有統計應用SAS 6.12軟件包，定量資料采用t檢驗，必要時采用單因素方差分析，定性資料采用x2 檢驗。
其他
一、實驗討論
人癌轉移模型的原位移植戰略是目前國際上普遍接受的研究人癌侵襲和轉移的重要理論基礎，理想的胃腸腫瘤動物模型應該具備以下條件：（1）致癌方法簡單、易行；（2）經濟、快速；（3）指標客觀、明確；（4）對癌變器官的特異性高；（5）重復性好；（6）誘發腫瘤的病理類型、生物學行為、電鏡下表現及組織化學改變等應與人體腫瘤相類似。
種植于裸鼠皮下生長的人胃癌組織，在形態、功能、生化特征等方面與人胃癌十分相似，但因其周圍有結締組織包裹， 即便是選用高轉移性的腫瘤，也僅僅形成局部腫瘤，限制了其浸潤及轉移。原位移植模型則能夠克服這一限制。結果表明移植瘤發生局部浸潤、淋巴結轉移及遠處它臟轉移，且轉移率較高，部分有腹水形成，而且較好地保持了原始腫瘤的組織結構和細胞形態、功能、生化特征，轉移的發展也具有與臨床胃癌患者基本一致的規律，與皮下移植模型比較具有顯著優越性。許多學者認為腫瘤轉移不僅與其生長環境有關（土壤學說），還取決于其本身的轉移潛能（種子學說）， 即依賴于腫瘤細胞之間、腫瘤細胞與間質、腫瘤細胞與宿主之間的相互作用，激活細胞分泌蛋白降解酶類，降解基底膜，此過程還能誘導腫瘤細胞血管產生，通過信號轉導系統激活細胞的移動性，這些都是腫瘤浸潤轉移所必須的過程。
本實驗采用的OB膠粘貼法造模仍然沿用當前公認的完整組織塊法建立類似于人胃癌臨床轉移的原位移植裸鼠模型，既有原位移植的優點，又保持癌組織的完整結構， 避免了細胞表面結構遭到破壞而導致惡性腫瘤生物學行為和自然屬性、惡性程度的改變，能更好地模擬臨床腫瘤發生與發展的過程； 同時將手術方法經過適當的改進，用OB 膠粘貼取代了傳統的胃囊法， 操作相對簡便，手術時間大大縮短，對裸鼠的創傷小，術中出血少，術后恢復相對較快，故活率明顯提高；另外選用胃大彎處，因其近胃竇旁血管稠密，血液供應豐富，腫瘤生長迅速，多數可以出現幽門梗阻、腹水、遠處臟器轉移及惡病質等表現，能夠較好地重現胃癌的臨床轉移過程，為人類胃癌的生長、轉移機制及抗轉移治療方面的研究提供了一種較理想的動物模型；本方法操作簡便，不需專業人士造模，費用相對較低，有推廣的價值。因此，采用OB膠粘貼法建立胃癌原位移植模型是目前研究人胃癌轉移機制以及抗轉移治療較為理想的轉移實驗模型，該模型的成功建立為今后胃癌實驗研究開辟了廣闊的前景。