人胃癌裸鼠原位種植轉移模型的建立實驗_優化膠粘貼法

ALBPc nuPnu 裸鼠

OB 吻合膠生物蛋白膠

一、實驗材料準備

ALBPc nuPnu 裸鼠20，雌性，4～6 周齡，體重18～20 gSPF 級條件下飼養。

二、裸鼠皮下移植瘤的建立和傳代

1.  收集體外培養的SGC27901 細胞，使細胞含量為5 ×10_⁷/mL ，取0.4 mL 腹腔注入，當腹水形成明顯時取腹水細胞培養，然后調整細胞含量至5 ×10⁷/mL。

2.  取0.2 mL 注入另一只裸鼠背部皮下，當皮下移植瘤長至直徑1 cm左右時取出移植瘤，將瘤組織切成約1～2 mm 的小塊，經18 號套管針送至另一只鼠皮下，做鼠間傳代共5 代 。

三、原位移植模型的建立

1.  將傳代鼠脫頸處死，無菌操作，從背部皮下剝取腫瘤組織，剔除纖維包膜，切開選取生長良好的魚肉狀的瘤組織，切成1mm ×1 mm ×1 mm 的小塊，置于生理鹽水中備用。

2.  腹腔注射40 mg/kg 體重的0.1 %的異戊巴比妥鈉麻醉裸鼠，常規皮膚消毒，沿左側腹部正中旁線切開，切口約1.5 cm ，小心暴露腹膜、胃壁，用一次性注射針頭輕微損傷胃大彎中部漿肌層，以出血為度。

3.  取7 只裸鼠,將2～3 塊腫瘤組織用醫用OB 吻合膠粘合在胃壁破損處，另外7 只裸鼠，將2～3 塊腫瘤組織用豐聯生物蛋白膠粘合在胃壁破損處(圖1 ，見彩插3。) ，待膠干后，分別用4 - 0 號線縫合腹膜、腹壁，關腹。

四、處死動物及移植瘤的觀察

1.  定時觀察所有裸鼠全身狀況、運動情況、腹部體征。

2.  當荷瘤鼠出現明顯消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭體征時，脫頸處死解剖，取原位瘤、胸腹腔臟器和腫大淋巴結，收取腹水。

3.  所取標本經10 %甲醛固定，石蠟包埋、切片、HE 染色，做組織病理學檢查。
 

五、統計學分析

用SPSS 10.0 統計軟件，定性資料間的比較采用χ² 檢驗，定量資料間的比較采用t檢驗。

一、實驗討論

建立最符合人體胃癌自然生長狀態的胃癌侵襲和轉移模型是研究胃癌發病機制及預防和治療措施的關鍵所在。隨著1966 年無胸腺小鼠的出現及1975 年裸大鼠的重新建群，將人類腫瘤組織或細胞直接接種于裸鼠身上，建立人類腫瘤動物模型的方法日趨成熟。20 世紀80 年代末期，進一步研究發現,移植的腫瘤能否發生轉移，不僅取決于瘤細胞本身的轉移潛能，還需要宿主本身器官環境因素的參與。在所有的植入途徑中，原位移植最易發生類似人類腫瘤的轉移過程，從此，形成了人胃癌轉移模型的原位種植技術，即用癌細胞懸液注射種植于裸小鼠胃壁而成。隨著實驗方法的不斷完善，人們又發現將完整瘤組織塊原位接種建立的胃癌轉移鼠模型，既具備原位移植的優點，又保持了癌組織結構上的完整性，所以，原位移植成功率、轉移率、荷瘤鼠中位生存期等指標均很高，能更好的模擬臨床胃癌病人疾病的發生、發展過程，在此基礎上，人們逐漸摸索了縫掛法、胃囊法、膠粘貼法等胃癌原位種植造模方法，使實驗操作越來越簡便，模型的成瘤率和轉移率均有提高，尤其是OB 膠粘貼法,直接將傳代的腫瘤組織粘貼在胃壁上，手術操作簡單，對裸鼠的創傷小，術后恢復快，成活率非常高。

但是，醫用OB 膠在臨床上一般用于造瘺口和吻合口的封閉，為無色或淡黃色透明液體，在組織液、血液等帶陽離子物質存在下迅速固化，增加吻合口的封閉性和吻合強度，其主要成分為α- 氰基丙烯酸酯類物質，在體內不能完全被吸收，掃描電鏡觀察其由直徑213 nm 的細小纖維構成網絡，紅細胞不易通過，有明顯的促進血液凝固、血塊收縮效應，因為膠體不能馬上吸收，機械性的封閉作用有可能影響腫瘤組織的外生性生長，使腫瘤中心容易發生壞死，而FS 生物蛋白膠的主要成分為可被機體吸收的纖維蛋白原，大約2 周左右，生物膠將被機體完全吸收，這時裸鼠胃壁腫瘤剛好進入快速生長期，因此，不會對腫瘤的生長狀態造成任何影響 。目前，采用生物蛋白膠粘貼法建立裸鼠胃癌原位種植動物模型的方法文獻還沒有報道。我們的研究結果表明，OB 膠粘貼法建立的裸鼠胃癌原位種植動物模型，腫瘤中心容易發生大片壞死，而改用易吸收的FS 生物蛋白膠粘貼法可解決這一問題，更好的滿足實驗需要，與OB 膠組相比，FS 生物蛋白膠組動物模型更容易出現腹水和幽門梗阻，原位腫瘤的直徑相對大些。上述特點均表明，可吸收的FS 生物蛋白膠在建立胃癌原位種植動物模型時與OB 膠相比具有更大的優勢，FS 生物蛋白膠法建立的胃癌轉移動物模型，能更好的重現人體胃癌的臨床轉移過程，為人類胃癌的生長、轉移機制及抗轉移治療方面的研究提供更理想的動物模型。