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  • 發布時間:2020-07-14 09:48 原文鏈接: 人血清中白蛋白與球蛋白的分離

    隨著超速離心機轉速的提高,用超速角式轉頭分離人血清中白蛋白與球蛋白的離心時間越來越短,用5—20%線性蔗糖梯度作蛋白質速率—區帶(Rate—zonal)分離,樣品以近等速沉降,低于分析實驗結果。下面的簡單分離實例有代表性。

     

    設備:

    離心機:智能型超速離心機(Hitachi CP—M系列,Beckman L—XP系列)

    轉頭:定角:P90AT,P80AT,比較實驗轉頭:P40ST

    P90AT:  90,000rpm,  700,000xg,  8×12ml   K=25

    P80AT:  80,000rpm,  615,000xg,  8×12ml   K=27

    P40ST:  40,000rpm,  284,000xg,  6×13ml   K=139

    離心管:12ml及13ml PA管

     

    樣品:標準人血清1 ml (2.5mg/ml),用0.15M NaCl溶解。

     

    梯度液:5—20% 線性蔗糖梯度, P90AT及P80AT梯度液量約9.5ml ,P40ST梯度液量約9.6ml。

     

    方法:5—20%蔗糖梯度液上鋪約1ml 人血清,對 P90AT及P80AT必須裝滿(用血清調節),P40ST加樣至距管口3mm。

     

    離心參數:

    P90AT:90,000rpm,2小時,2.5小時,3小時,5℃,加速“5”減速“5”

    P80AT:80,000rpm,2小時,2.5小時,3小時,5℃,加速“5”減速“5”

    P40ST:40,000rpm,14小時,16小時,18小時,5℃,加速“8”減速“8”

    曲線繪制:用日立DGF—U 梯度儀通過上口連續取樣至帶流動池分光光度計連續測O.D.(280nm)后收集。

     

    結果及分析:

    轉頭

    白蛋白峰頂距離從管口算起的容量(ml)

    球蛋白峰頂距離從管口算起的容量(ml)





    P90AT

    2小時

    2.5小時

    3小時

    2小時

    2.5小時

    3小時

    4.5

    5.7

    6.8

    6.2

    7.9

    9


    P80AT

    4.3

    5.5

    6.6

    6

    7.6

    8.7

    P40ST

    14小時

    16小時

    18小時

    14小時

    16小時

    18小時

    3.6

    4.1

    4.7

    5.0

    5.8

    6.6


     

     

    轉頭

    白蛋白峰頂在蔗糖梯度位置%

    球蛋白峰頂在蔗糖梯度位置%





    P90AT

    2小時

    2.5小時

    3小時

    2小時

    2.5小時

    3小時

    10.0

    11.7

    13.2

    12.7

    14.7

    16.7


    P80AT

    9.9

    11.6

    13.0

    12.5

    14.5

    16.5

    P40ST

    14小時

    16小時

    18小時

    14小時

    16小時

    18小時

    7.5

    8.3

    9.0

    9.9

     11.0

    12.0


     

     

    分析:根據以上結果,可以看出:

    1.在5—20%蔗糖線性梯度中白蛋白與球蛋白基本上以等速沉降

    2.用P40ST或P80AT轉頭分離人血清白、球蛋白在最高轉速離心2.5小時效果最佳,用P40ST轉頭離心18小時效果最好。

    3.用P40ST轉頭分離的結果O.D. 對離心管從管口算起容量曲線的峰形比P90AT的峰形尖銳一些,但考慮到離心機和轉頭的壽命,用P80AT 轉頭離心性價比最佳。


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