從臍靜脈分離干細胞操作步驟

從臍靜脈分離干細胞

試劑和材料：

1. 培養基：完全LG-DMEM：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM，添加10%熱滅活胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；

2.A；

3.胰蛋白酶，0.05%，含EDTA；

4.膠原酶A，0.1%用A配制；

5.培養瓶；

6.導管；

實驗方法：

1. 在正常分娩后6-12h內收集和處理臍帶；

2.在臍靜脈內插入導管，用A完全地洗2次；

3.夾住遠端臍帶；

4.用0.1%膠原酶溶液充滿靜脈；

5.夾住近端臍帶；

6.將臍帶在37℃孵育20min；

7.輕輕按摩臍帶，收集含有內皮和內皮下層細胞的懸浮液，600g離心10min；

8.用培養基重懸細胞；

9.計數后，按1&time10³個細胞/cm2的密度將細胞接種到75cm²的培養瓶中；

10.3天后更換培養基，除去未貼壁細胞，保留貼壁的細胞繼續生長，每3天更換一次新鮮培養基，至大約2周后可見成纖維樣細胞生長；

11.在這種情況下，用0.25%胰蛋白酶/EDTA收集細胞，傳代到新培養瓶中繼續擴增；