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  • 發布時間:2021-05-22 16:11 原文鏈接: 以PCR為基礎的檢測工具的優缺點

    第一,PCR反應是快速的。整個DNA提取,擴增和檢測的過程通常少于6小時,如果反應利用嵌套的引物,過程可能長些。對于一些樣本來說,比如來自糞便和表皮,就需要在DNA提取中增加步驟,這樣就延長了整個檢測的時間到14小時。
      
    用購買的核苷酸提取工具就能縮短檢測時間,同時機械進行提取,使PCR方案最優化或使用加快熱循環技術。有了優化的樣本,快速提取和光循環熱循環,整個檢測時間能縮短到2小時。但通常是6-8小時。
      
    與以培養基為基礎的方法要花2-5天的時間相比較,這是巨大的進展了。這也比一些需要有精確計算結果的培養基濃縮的抗體檢測實驗要快。當購買的實用抗體基礎的檢測工具比PCR基礎的方法快時,大部分這樣的化驗只能用于非常有限的生物體上。

    第二,PCR不需要培養。這是與PCR基礎的檢測的速度密切相關的。既然PCR是十分靈敏的(少到10 cfus的樣本就能被檢測),培養通常是沒必要的。大多數最新的實用PCR檢測工具需要有選擇性的濃縮,特別是當樣本包括大量的PCR抑制劑時。用核苷酸提取方法能夠避免培養,核苷酸提取方法產生了PCR所需一定質量的DNA并且優化了PCR反應。如果在大量樣本中檢測少量的病原體,或者病原有機體在PCR靈敏度的極限以下的情況下,將需要使用培養。在一般情況下,使用培養的情況是很少的。去除了培養的步驟,時間將被節省下來。比節省時間更重要的是,去除了培養,那些難以或不能培養的生物體就可以進行檢測。這些生物體包括某種病毒、真菌、厭氧性生物和支原體。

    第三,PCR的花費合理。與培養或抗體基礎的化驗相比,PCR基礎的診斷是十分經濟的。考慮到細菌的培養,有較昂貴的花費。大多數樣本為了正確的鑒定需要培養和重復培養,這需要大量的手工時間(加上化驗的花費),也增加了污染的危險。

    作為比較,大多數抗體化驗所需的手工時間很少但化驗本身很昂貴。 PCR反應的成分(引物,酶,dNTPs和緩沖液)的花費比每次化驗的花費少40%,而反應的時間包括核苷酸分離,通常在一小時以內。當然這依賴于樣本、技術員和用于分離核苷酸的技術。既然PCR所用的時間少,它的花費也少。但是,PCR需要熱循環,UV來源和一些類型的圖象捕獲裝置,因此PCR實驗室的最初花費比較高。

    我們再討論另外一些PCR在臨床領域使用的基本原理
      
    第一, PCR不是抗原基礎的。
      
    抗體基礎的檢測工具(ELISA和其他)不僅檢測直接抗病原體的人類抗體,而且能檢測病原體上的表面抗原。人類抗體檢測工具因此需要免疫反應的存在,以及在正確檢測抗原存在之前抗體濃度的測定。在新近感染的情況下,這種測試不能檢測針對病原體的人類抗體,可能不能正確反映是否有感染。事實上,被感染的病人,沒有充足的時間來提高用于檢測的濃度,這是HIV抗體基礎檢測的通常的問題。由于相同的原因,這種類型的測試對檢測無免疫應答患者的病原體存在困難。反過來講,抗體基礎的測試也會給出錯誤相反的結果。

    然而抗體基礎的檢測最大的問題是它不能檢測新的病原體亞型,由于表面抗原發生改變,而導致了錯誤的陰性結果。PCR基礎的檢驗也可能由于DNA的變化、突變而遇到相似的問題,但PCR基礎的檢驗能夠進行設計,使這些錯誤的陰性結果最小化。盡管有這些缺點,抗原基礎的檢測工具是十分重要的檢測方法,在大多數情況下比PCR檢測要迅速。
      
    第二, 檢驗易按客戶的要求設置,以適合特殊的需要。
      
    通過簡單使用不同的特殊目標引物,工具能迅速設計,用于許多檢測。
      
    第三, PCR容易使用,是由時間證實的技術。
      
    通過使用有商業價值的核苷酸提取產物,用于病原體檢測的樣本能在少于十分鐘的時間內被例行操作。一旦進行操作,樣本被加入反應體系中,進入熱循環。反應完成后,樣本能被自動系統或凝膠電泳所分析。少數的PCR檢測將能完全自動化。儀器將進行所有操作,從樣品的準備到分析結果。這樣的系統將十分昂貴,可能只能適應制造商的平臺。這對大多數臨床實驗室無吸引力,但當價格下降后,將最終使PCR診斷自動化。


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