我們做蛋白質電泳的人都知道,銀染色很靈敏,有很強的說服力,但通常膠背景較深,不易掃描。在這里介紹一下低背景的蛋白質銀染方法。
Step Reagent Time/min
Fix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60
Rinse 50% EtOH 5 min, 3 times
Sensitive 0.02% Na2S2O3 1 min
Rinse Double distilled H2O 1 min, 3 times
Silver 0.5% AgNO3, 0.075% HCHO(現用現加) 20 min
Wash* Double distilled H2O 1 min, 2 times
Develop 6% Na2CO3, 0.0004% Na2S2O3, 0.05% HCHO 4-15 min
Stop 50% EtOH, 12% HAC
*:說明,此步中洗滌過程要控制好,時間太長,可能顯色時間太長甚至染不出色;反之,時間太短,銀沒有洗干凈,背景變深。但做幾次以后就很快掌握了。
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