佐劑（adjuvant）的制備和作用

一、概念　
 
佐劑（adjuvant）是指能夠增強免疫應答或改變免疫應答類型的物質，應用時可與抗原同時或預先注射于機體。佐劑本身可以有免疫原性，也可以沒有免疫原性。
 
應用佐劑的目的是為了提高抗原對機體的免疫原性，從而提高抗體的效價。顆粒性抗原（如細菌、細胞）因具有較強的免疫原性，一般情況下不使用佐劑即可取得較好的免疫效果。對于可溶性大分子量的蛋白質免疫原、人工抗原，初次免疫時必須使用佐劑才能取得較好的免疫效果。另外，一般不連續兩次使用完全弗氏佐劑，以免導致動物嚴重反應。
 
免疫佐劑的作用歸納起來有：
 
1、延緩抗原的釋放，保護抗原不被水解，佐劑可延長抗原在體內滯留時間，避免頻繁注射，有利于高親和力抗體的產生；
 
2、活化巨噬細胞并促進巨噬細胞與T和B細胞的相互作用，從而對淋巴細胞有特異性加強刺激的作用；
 
3、佐劑吸附了抗原后，增加了抗原的表面積，使抗原易于被巨噬細胞吞噬；
 
4、佐劑能刺激吞噬細胞對抗原的處理；
 
5、可刺激致敏淋巴細胞的分裂和漿細胞產生抗體。故免疫佐劑的作用可使無免疫原性物質變成有效的免疫原；
 
6、可提高機體初次和再次免疫應答的抗體滴變；
 
7、改變抗體的產生類型以及產生遲發型變態反應，并使其增強。
 
由于佐劑常混有微量的其他物質，這些物質進入機體后也可引起抗體的產生，影響抗體的特異性。注射完全佐劑可引起局部炎癥反應，使局部組織壞死
 
二、佐劑的制備條件
 
佐劑的條件作為一種良好的佐劑，必須具備下列條件
 
1、增加抗原的表面積，并改變抗原的活性基團構型，從而增強抗原的免疫原性；
 
2、佐劑與抗原混合能延長抗原在局部組織的存留時間，減低抗原的分解速度，使抗原緩慢釋放至淋巴系統中，持續刺激機體產生高滴度的抗體；
 
3、佐劑可以直接或間接激活免疫活性細胞并使之增生，從而增強了體液免疫、細胞免疫和非特異性免疫功能；
 
4、良好的佐劑應具有無毒性或副作用低的特點。
 
三、常用佐劑的種類和制備
 
佐劑主要可分為兩種：一種本身具有免疫原性，如百日咳桿菌、抗酸桿菌（結核分枝桿菌）以及革蘭陰性桿菌等；另一種本身無免疫原性，如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等。目前應用最多的是弗氏佐劑（Freund adjuvant）。
1、弗氏佐劑
 
弗氏佐劑是目前動物實驗中最常用的佐劑，分為不完全弗氏佐劑和完全弗氏佐劑。不完全弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成，組分比為1～5：1，可根據需要而定，通常為2：1。不完全佐劑中加卡介苗（最終濃度為2～20mg/ml）或死的結核分枝桿菌，即為完全弗氏佐劑（FCA）。 一般首次注射時用1／2體積FCA加上1／2體積的抗原進行乳化，第二次或第三次注射時用不完全佐劑或不用佐劑。如不加佐劑，則抗原量增大10-20倍。
 
配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存備用。
 
在免疫動物前，先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合，佐劑和抗原體積比一般為1：1，制備成"油包水"乳狀液。因為含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復合物，注射入動物體內時一定要保持乳化狀態。抗原用量視抗原分子量不同及免疫原性及免疫動物不同而有一定差異，無統一標準和固定模式。一般是每兔（約2kg重）或每羊（約20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超過3mg。佐劑與抗原乳化可按如下方法進行：
 
（1） 研磨法
 
先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內，待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，繼續研磨一段時間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原，缺點是研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大。
 
（2） 注射器混合法
 
將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內，兩注射器之間以一細膠管相連，注意排凈空氣，然后交替推動針管，直至形成粘稠的乳劑為止。本法優點是容易做到無菌操作，抗原損失少，適用于制備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化完全，個別抗原，用塑料注射器根本推不動，而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴狀浮于水面，即乳化完全，為合格的油包水劑。
 
（3） 超聲
 
實驗室條件好點的，比如說有超聲破碎儀的，一定要控制超聲頻率和時間，超聲容易激發一些自由基，對抗原有未知損害。乳化方法要根據抗原和需要而定。
 
2、氫氧化鋁佐劑
 
取5%硫酸鋁溶液250ml，在強烈攪拌下加入5%氫氧化鈉溶液100ml，用生理鹽水離心洗滌沉淀2次，再懸入生理鹽水中使達250ml。免疫接種時，取適量氫氧化鋁佐劑加等體積抗原即可免疫。
 
3、明礬佐劑
 
鉀鋁礬（硫酸鋁鉀）在一定pH條件下產生氫氧化鋁膠體吸附抗原而產生佐劑效應。制備方法是用生理鹽水溶解蛋白質抗原，在攪拌下緩慢滴入一定量10% 硫酸鋁鉀溶液，用NaOH調pH到6．5，此時溶液變成乳狀懸液，離心后去掉上清液，沉淀用生理鹽水洗滌二次，加入硫柳汞防腐，4℃保存備用。明礬佐劑一般用于肌肉注射，皮下注射容易引起肉芽腫和膿腫。
 
4、脂質體
 
脂質體包封抗原后，可使抗原延緩釋放，并且脂質體顆粒有刺激機體免疫反應的作用。因此，用脂質體包封的抗原免疫動物可提高免疫效果。