（1）在使用油鏡之前，必須先經低、高倍鏡觀察，然后將需進一步放大的部分移到視野的中心。
（2）將集光器上升到最高位置，光圈開到最大。
（3）轉動轉換器，使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢轉動油鏡，在轉換油鏡時，從側面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。
（4）用左眼觀察目鏡，并慢慢轉動細調節器至物象清晰為止。
如果不出現物象或者目標不理想要重找，在加油區之外重找時應按：低倍→高倍→油鏡程序。在加油區內重找應按：低倍→油鏡程序，不得經高倍鏡，以免油沾污鏡頭。
（5）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙擦一遍,再用沾少許二甲苯的擦鏡紙將鏡頭上和標本上的香柏油擦去，最后再用干擦鏡紙擦干凈。
油鏡是實驗室常用的顯微鏡之一，清晰度略高于普通光學顯微鏡，用于觀察衣原體，細菌，細胞器等較細微的結構。