一、目的與要求
1、掌握光學顯微鏡的構造及使用方法。
2、掌握植物根尖細胞有絲分裂制片技術。
3、掌握有絲分裂過程中染色體的形態特征和動態變化。
二、實驗原理
有絲分裂是植物細胞分裂的主要方式,細胞分裂過程中,核內染色體準確地復制,并有規律地、均勻地分配到兩個子細胞中去,使子細胞和母細胞的遺傳組成一樣,保證了植物細胞的遺傳性狀的一致。各種生長旺盛的植物組織中,如根尖組織、莖尖組織、居間分生組織、愈傷組織等,常進行著劇烈的細胞有絲分裂。在細胞分裂的適當(分裂旺盛期)時候取材,進行預處理,固定、解離、染色和涂抹壓片等方法,使細胞、染色體分散,便于在顯微鏡下觀察染色體的形態特征和變化特點及進行染色體計數。
三、實驗材料
洋蔥(Allium cepa, 2n=16)根尖組織
四、實驗儀器
顯微鏡、分析天平、酒精燈、剪刀(或刀片)、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、濾紙、鉛筆、標簽紙、膠水、棕色瓶。
五、實驗試劑
1、卡諾固定液:冰醋酸:無水酒精=1:3(體積比)
2、染色液(改良苯酚品紅染液)配法順序如下:
原液A:取3克堿性品紅溶于100毫升70%酒精中,此液可以長期保存。
原液B:取A液10毫升加入90毫升5%苯酚(即石炭酸)水溶液中(2周內使用)。原液C:取B液55毫升加入6毫升的冰醋酸和6毫升38%的甲醛(可長期保存)。
染色液:取C液10-20毫升,加入90-80毫升45%醋酸和1.5克山梨醇。
3、1N鹽酸
六、實驗步驟
(一)材料準備
通過休眠的洋蔥鱗莖,經日曬后,置于盛有清水的小燒杯上,根部與水接觸,20~25℃光照條件下培養2~3天,待根長1~2cm時,于上午9:00~11:00剪下根尖備用。
(二)預處理
為了獲得較多中期分裂相的細胞,同時使染色體縮短和分散,可對根尖進行預處理,將根尖浸在蒸餾水中于在1~4℃低溫下處理24小時。