光學顯微鏡的使用、植物細胞有絲分裂的制片和觀察(2)

（三）固定

用蒸餾水洗凈材料，再用卡諾固定液（用量應為材料體積的15倍以上）室溫下固定30~60分鐘。固定的材料如暫不制片，可經90％酒精→80％酒精→70％酒精（各半小時）浸泡進行轉換，最后置于70％酒精內放入0~4℃冰箱，約可保存半年。如保存時間太長，需重新固定后再用。

（四）解離

根尖、莖尖等體細胞需經處理，除去細胞間的果膠層，并使細胞壁軟化，才便于壓片。這種處理過程稱為解離，解離時間的長短依植物材料和解離液的不同而不同。時間短細胞不易壓散，時間過長，細胞被壓破，且影響染色效果。

取材料的根尖，在生長點處切取1毫米左右（一般一個根尖可取4~5段），放入1N HCl酸解10分鐘左右，取出，用水漂洗三遍。

注：1N HCl由36%~38%濃鹽酸取83ml定容至1升配置而成。

（五）制片

選取已處理過的根尖一枚，放在干凈載玻片中央，除去非分生組織的部分，并吸去多余水分。另取一張干凈載玻片，呈十字形交叉蓋在有根尖的載玻片上，用大拇指按壓在載玻片的中央，使根尖壓成一簿層，然后將兩載玻片分開，各滴一小滴染色液進行染色，稍等片刻，取一蓋玻片，蓋玻片一邊靠在離材料不遠的載玻片上，左手握鑷子頂著蓋玻片，右手握解剖針托住蓋玻片徐徐放下，若染色液不能布滿蓋玻片時，可在蓋玻片邊緣稍加染色液，然后用一張大小合適的濾紙覆蓋在蓋玻片上，一手固定蓋玻片，另一手持鉛筆橡皮頭，對準材料輕敲，使根尖細胞分散均勻。制好的片子若不能及時進行顯微鏡觀察，可用礬士林臨時封住蓋玻片四周。

（六）觀察

制備好的細胞學片子，置于顯微鏡的載物臺上，先用低倍鏡（10×10）調焦觀察，尋找到具有分裂相的細胞后，再轉換到高倍鏡（10×40）下觀察。

七、顯微鏡使用注意事項

1.取顯微鏡時必須右手握鏡臂，左手托鏡座，嚴禁單手提鏡，勿使鏡體傾斜，防止目鏡從鏡簡中滑出或碰撞顯微鏡。

2.注意姿勢。將顯微鏡平穩地放在自己左側的適當地方，鏡臂向著自己，鏡檢者姿勢要端正。一般用左眼觀察，右眼便于繪圖或記錄。兩眼必須同時睜開，以減少疲勞。

3.將鏡臺向上調節時，須從側面觀察，以防壓碎標本玻片或損壞物鏡鏡頭。

4.一般情況下觀察標本均要加蓋蓋玻片，切忌水、灑精或其它藥品浸損鏡頭或鏡臺。觀察標本時，必須按低倍鏡——高倍鏡的順序進行。

5.顯微鏡各部要保持清潔，光學部分必須用鏡頭紙擦試，絕對禁止用其它物品擦試。其它部分可用紗布輕輕擦試。

7.觀察、繪圖時應雙眼同時張開，以便在觀察的同時繪圖。

8. 使用顯微鏡時一定嚴格按規程操作，遇到問題，如機件不靈，千萬不可用力轉動，切忌任意拆修，應立即報告指導教師。

9.使用完畢要將顯微鏡擦試干凈，恢復原狀，轉動物鏡轉換器，將4×物鏡轉到光路上，使鏡臺調至接近物鏡。

10.關閉光圈、電源，適當下降聚光鏡，將塑料罩罩好，及時收回鏡箱。