1. 構建其必需基因的染色體拷貝已被破壞的單倍體菌株，及帶有完整的必需基因和URA3選擇標志的YEp質粒。
2. 將必需基因亞克隆到YCp載體（帶有URA3以外的選擇標志），取約10~20 μg 用羥胺或其他技術進行誘變。
3. 轉化至步驟1的菌株中，在添加了尿嘧啶的省卻成分平極上，選擇YCp質粒，于允許溫度下培養（通常為25℃）。
4. 將每一個轉化平板影印到兩個帶有5-FOA并能選擇YCp載體的平板上，其中一個平板于允許溫度下培養，另一個于非允許溫度下培養（通常為36℃）。
5. 選取在允許溫度而不是非允許溫度下出現乳頭狀菌落，從轉化平板上回收這些 菌落，并劃線分離單茵落。
6. 在兩種溫度下從每一個待檢測Ura- 乳頭狀菌落中重復檢測大約6個單菌落，作為對照，在兩種溫度下用平板培養，以排除無關染色體的溫度敏感突變，對于每一個經過重復檢驗的溫度敏感突變，從培養于允許溫度下的5-FOA平板上回收Ura- 乳頭狀菌落（在另一個對YCp載體保持選擇壓力的平板上劃線分離），通過轉化大腸桿菌從這些菌株中回收質粒（現在只含有YCp載體）。
7. 將基因（現在帶有ts突變）亞克隆到YIp5的載體并應用移換技術將此突變基因引入染色體位點。 展 | 