克隆化酵母DNA的操作實驗

實驗材料 酵母

實驗步驟

1.   將待研究的基因亞克隆到YIP質粒。

2.  用限制性內切酶在克隆化基因內部切開，使質粒線性化。

3.  用1~10 μg DNA加上擔體DNA轉化適合的菌株，通過質粒上帶的標記進行選擇，在選擇培養基上純化幾個轉化子，制備DNA，應用Southern 雜交確證整合是否發生在所期望的位點，并且測定是否發生了多重整合。

注意事項

如果沒有單限制性酶切位點，可以在此區域用一個或多個酶消化產生一個缺口，但缺口兩邊須具有足夠的同源序列。