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  • 發布時間:2021-11-19 11:50 原文鏈接: 免疫親和柱熒光計快速測定法

      (1)試劑與設備

      ①4-系列真菌毒素專用熒光計。

      ②均質器(250mL)。

      微量移液器(0.5mL)。

      渦流混合器。

      ⑤塑料注射器(60mL)。

      ⑥VICAM T-2毒素親和柱。

      ⑦聚乙二醇(PEG),相對分子質量8000。

      色譜級甲醇。

      ⑨PBS緩沖液。

      ⑩氯化鈉。

      ?VICAM T-2毒素衍生液。

      ?VICAM T-2毒素標定用溶液(紅色)。

      ?0.02%吐溫/PBS 緩沖液:0.1mL 吐溫+9.99mL PBS 緩沖液+490mL 水。

      (2)樣品的提取與過濾

      ①稱取50g 樣品、5g 氯化鈉、10g PEG 置于均質杯中。

      加入150mL 25%的甲醇,高速均質1min。

      ③用折疊式濾紙過濾,用干凈的燒杯收集25mL的濾液。

      ④用25mL 的水將濾液稀釋1倍。

      ⑤將 T-2毒素親和柱與60mL 塑料注射器筒相連。

      ⑥將40mL T-2毒素標定用溶液加入至塑料注射器筒中。

      (3)樣品的制備與培養

      ①在塑料注射器筒中加入0.5mL 的T-2毒素衍生液。

      ②將塑料注射器筒從操作架上取下,用硅橡膠塞子塞好,翻轉混合4~5次,然后再置于操作架上。

      (4)色譜柱分離操作與測定

      ①將空氣泵與親和柱相連,使注射器中的溶液以1~2滴/秒的速度通過親和柱。

      ②用0.02%吐溫/PBS 緩沖液以1~2滴秒的速度通過親和柱。

      ③用2mL 色譜級的甲醇以1滴/秒的速度通過親和柱,濾液收集于測試管中。

      ④將測試管置于熒光計中進行測定。

      ⑤檢測限:0.15mg/kg,測定范圍0~5.0mg/kg。


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