大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）酶聯免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
10U/L -320 U/L
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）水平。用純化的大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入NAG，再與HRP標記的NAG抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的NAG呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）濃度。
試劑盒組成：
1.30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2.酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（640 U/L） 0.5ml×1瓶
3.酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4.樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5.顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6.顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求：
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
320U/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
160 U/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
80 U/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
40 U/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
20 U/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
