一 基本原理
免疫組織/細胞化學是利用抗原抗體具有高度特異性結合反應的原理，采用已知抗體檢測組織或細胞的抗原物質，然后以適當的方式顯示其結合信號以證明組織或細胞是否存在未知抗原，并進行定性、定位或定量的研究。
二 基本步驟
1 三步法：以SP（鏈霉卵白素-過氧化物酶）試劑盒為例：
石蠟切片脫蠟至水。
蒸餾水沖洗，PBS浸泡5min，如需采用抗原修復，可在此步后進行。
3% H2O2室溫孵育5-10min，以消除內源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗，5min×3次。
5-10% 正常山羊血清封閉，室溫孵育10min。傾去血清，勿洗，滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃孵育1-2小時或4℃過夜。
PBS沖洗，5min×3次。
滴加適當比例稀釋的生物素標記二抗，37℃孵育10-30min；或滴加第二代生物素標記二抗工作液，37℃或室溫孵育10-20min。
PBS沖洗，5min×3次。
滴加適當比例稀釋的辣根酶標記鏈霉卵白素（PBS稀釋），37℃孵育10-30min；或第二代辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37℃或室溫孵育10-20min。
PBS沖洗，5min×3次。
顯色劑顯色（DAB或AEC）。
自來水充分沖洗，復染，脫水透明，封片。
2 二步法: 以通用型二步法檢測試劑盒為例。
石蠟切片脫蠟至水。
蒸餾水沖洗，PBS浸泡5min，如需采用抗原修復，可在此步后進行。
3% H2O2室溫孵育5-10min，以消除內源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗，5min×3次。
滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃孵育1-2小時或4℃過夜。
PBS沖洗，5min×3次。
滴加試劑1（polymer helper）,室溫或37℃孵育20min，PBS或TBS沖洗，5min×3次。
滴加試劑2（poly pero×idase-anti-mouse/rabbit IgG），室溫或37℃孵育20-30min，PBS或TBS沖洗，5min×3次。
顯色劑顯色（DAB或AEC）。
自來水充分沖洗，復染，脫水透明，封片。
3 冰凍切片的免疫組化染色步驟：
冰凍切片4-8μm，冰凍切片后如不染色，必須吹干，儲存低溫冰箱內，或進行短暫預固定后儲存于-20℃冰箱。
室溫放置30min后，入4℃丙酮固定10min。
PBS沖洗，5min×3次。
用過氧化氫孵育5-10min，消除內源性過氧化物酶的活性。
PBS沖洗，5min×3次。
以下同石蠟切片免疫組化染色步驟（滴加一抗開始）
三 對照試驗設立：
免疫組化染色結果的判斷的一個重要因素就是設立陰性和陽性對照片，只有這樣才能排除各種因素的干擾而正確評價染色結果。
1 陽性對照：
選擇與待測片靶抗原相同，且含中等量抗原，染色前處理過程相一致的切片。所有試劑標準化，染色方法具可靠性，一致性。當陽性片呈陽性結果時，即可初步確定待檢片性質。
2 陰性對照：
排除染色過程中非特異染色和交叉反應所造成的假陽性結果。
（1） 空白對照：排除組織細胞自發熒光，或所含生物素，以及內源性酶等物質；
（2） 替代試驗：可用待測抗原的特異性抗體的同一動物免疫前血清或同種動物非免疫血清，也可用與靶抗原無關的抗血清；以及用緩沖液（PBS）替代等。
（3） 吸收試驗：可用過量已知抗原與抗體在4℃下充分反應，離心后進行免疫組化染色，已知陽性片呈陰性或弱陽性反應。
（4） 抑制試驗：多應用間接法，第一步先加非標記抗體，待充分反應后再加同一標記抗體，另一張切片可用正常血清或緩沖液代替非標記抗體。結果前者陰性后者陽性。