免疫細胞治療DC-CIK細胞的制備方法及SAFIRE功能性人CD3單抗
摘要
SAFIRE是“不含疊氮鈉，極低內毒素 Sodium Azide Free Immensely Reduced Endotoxin”的簡稱。生產中不添加任何載體，內毒素水平低至0.01EU/ug以下，更加適用于體內及體外的功能學實驗研究。
BioGems世界頂級抗體研發制造公司/品牌
SAFIRE功能性抗體是BioGems流式產品的一條重要的產品線，可用于激活、阻斷和中和實驗等，SAFIRE是“Sodium Azide Free Immensely Reduced Endotoxin”的簡稱，即“不含疊氮鈉，極低內毒素”。生產過程中沒有添加任何載體，內毒素水平低至0.01EU/ug以下，更加適用于體內及體外的功能學實驗研究。其中BIoGems 05121-25-500 SAFIRE 功能性CD3單抗就是BioGems品牌的具有顛覆性的品質與價格的典型代表。
疊氮鈉，及NaN3，屬于防腐劑，能阻斷線粒體的電轉運系統，對大多數有機體有毒性。在體內，疊氮化物和氰化物類似，對細胞色素氧化酶和其它酶有抑制作用，并能使體內氧合血紅蛋白的形成受阻，有顯著的降壓作，且對眼睛和皮膚有一定和刺激性。
內毒素在體內也可引起一系列反應，如各種炎癥反應、低血壓、白細胞數異常、血管內血凝結、休克甚至致死等、在體外，內毒素可以與CD14及其他一些受體反應、誘導單核細胞及巨噬細胞釋放細胞因子，觸發補體系統，促進B細胞分裂等。
兩者會帶來不可控的影響，降低實驗的特異性，并干擾結果的準確性。而BioGems的SAFIRE系列功能性抗體不含疊氮鈉，內毒素水平極低，完全可以滿足體內及體外功能學實驗需要。
BioGems目前已有SAFIRE功能性抗體132咱，其中人49種，小鼠89種，鼠8種，且產品種類在不斷增加。
Catalogue Number :05121-25
Description
The OKT3 monoclonal antibody specifically reacts
with the ε chain of the CD3/T lymphocyte antigen receptor complex. The
CD3 complex contains γ, δ, and ε chains, and it is part of the TCR
complex, expressed by all mature T lymphocytes and by the thymocyte
lineage. CD3 enhances the antigen recognition by signal transduction.
The
OKT3 antibody is an immunosuppressive, which has proven to be an
effective therapeutic agent in liver, heart, and renal allograft
rejection.
Additional Information
Clone：OKT3
Format：SAFIRE Purified
Applications：FC, FA, IHC
Reactivity：Human
Isotype：Mouse IgG2a, kappa
Research Interest：Adaptive Immunity
Cell Type： NK and NKT Cells, T Cells, Treg cells, Th17 cells
背景
CIK是“Cytokine-Induced Killer Cells”縮寫，中文全稱為“細胞因子誘導的殺傷細胞”。CIK是單個核細胞在CD3單抗和多種細胞因子（包括IFN-y,IL-2等）的作用下培養獲得的一群以CD3+CD56+細胞為主要效應細胞的異質細胞群，其既具有T淋巴細胞強大的抗腫瘤活性，又具有NK細胞（自然殺傷細胞）的非MHC（主要組織相容性抗原）限制性腫瘤殺傷能力。CIK細胞具有殺瘤活性高、殺瘤譜廣，對正常組織毒性低，體外可高度擴增等特點，是目前臨床上廣泛使用的過繼性免疫治療細胞。
DC是“Dendritic Cells”的縮寫，中文全稱為“樹突狀細胞”，因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名。DC是由2011年諾貝爾獎獲得者、加拿大籍科學家Ralph M.Steinman于1973年發現的，是目前發現的功能最強的抗原遞呈細胞（Antigen Presenting Cells,APC）。已證實，DC是唯一能夠顯著刺激初始T細胞（Na?ve T cells）增殖的APC，而其它APC（如單核巨噬細胞，B細胞等）僅能刺激已活化的或記憶性的T細胞。DC是機體適應性T細胞免疫應答的始動者，在腫瘤免疫中具有極其重要的作用。
DC-CIK即DC和CIK細胞在體外共培養，然后回輸給患者。嚴格的說，最終的效應細胞是經DC體外活化的CIK細胞。多項研究表明，DC與CIK具有協同作用，共同孵育后，DC表面共刺激分子的表達及抗原遞呈能力均明顯提高，而CIK的增殖能力和體內外細胞毒活性也得以增強，因些DC-CIK較單獨的CIK治療更為有效。若將腫瘤抗原負載的DC與CIK共培養，可刺激產生腫瘤抗原特異性的T細胞，這樣的DC-CIK治療則兼具特異性的非特異性雙重腫瘤殺傷作用，比未負載腫瘤抗原的DC刺激活化的CIK活性更強，常被用于臨床和科研。
培養原理
Preparation：The product should be stored undiluted at 4°C. Do not
freeze. The monoclonal antibody was purified utilizing affinity
chromatography. The endotoxin level is determined by LAL test to be less
than 0.01 EU/μg of the protein.
Formulation：Phosphate-buffered aqueous solution, ph7.2.
GM-CSF(粒細胞巨噬細胞集落刺激因子)：
GM-CSF是一種造血生長因子，在體外可刺激中性粒細胞和巨噬細胞的集落形成，并具有促進早期紅巨核細胞、嗜酸性祖細胞增殖和發育的功能。GM-CSF是最早被鑒定出來對于DC有作用的細胞因子之一。
GM-CSF在DC培養中的功能是促進單核細胞向大巨噬樣細胞分化，細胞表面MHC II類分子的表達得以提高，從而增強細胞的抗原遞呈功能。此外，GM-CSF還可促進DC的存活。
IL-4在由單核細胞誘導成DC的過程中發揮的作用是抑制巨噬細胞的過度生長，從而引導單核細胞向DC方向分化。若培養體系中不加IL-4，單核細胞將分化為巨噬細胞。同時，IL-4還有降低細胞表面表達CD14分子的能力。CD14表達水平的降低是單核細胞分化為DC的重要標志。
GM-CSF和IL-4共同作用可使單核細胞定向分化為未成熟DC（immature DC）,此時的DC具有較強的抗原攝取和加工能力，但抗原遞呈能力很弱。細胞表面中度表達MHC I 類、II 類分子和B7家庭分子(CD80，CD86等)，但不表達CD14.
TNF-α (腫瘤壞死因子-α)
TNF-α可下調未成熟DC 的巨胞飲作用和表面Fc 受體的表達，使細胞內MHC II 類
分子區室(class II compartment)消失，但能夠上調細胞表面MHC I 類、II 類分子和B7 家
族分子(CD80, CD86 等)的表達，使未成熟DC 分化為成熟DC(mature DC)，此時DC 的
抗原攝取和加工能力明顯減弱，而抗原遞呈能力顯著增強，可極強的激活T 細胞。
2．CIK 培養用細胞因子和抗體：
CD3 激發型單抗：
T 細胞活化的第一信號來自于T 細胞表面的受體，即T 細胞抗原受體(T cell antigen
receptor, TCR)與APC 提呈的抗原的特異性結合，也就是T 細胞對抗原的特異性識別。
TCR 是由2 條不同肽鏈構成的異二聚體，在T 細胞表面，其與CD3 分子通過非共價鍵
結合，形成TCR/CD3 復合體。TCR 識別特異性抗原后會引起CD3 和T 細胞表面的輔助
受體CD4 或CD8 分子的胞漿尾部聚集，進而激活與胞漿尾部相連的酪氨酸激酶(Lck, Fyn
和ZAP-70 等)，促使CD3 分子胞漿區的免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)進一步
磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，從而引起激酶活化的級聯反應(磷脂酰肌醇途徑或MAP 激
酶途徑等)，最終通過激活轉錄因子，使其進入細胞核內，結合于調控T 細胞增殖和活
化的靶基因(如IL-2 和IFN-γ等)，引起基因的表達和轉錄，T 細胞因而由靜止狀態轉為
增殖和活化狀態。
由上可見，CD3 分子在T 細胞活化信號的轉導中起著極其關鍵的作用。CD3 激發型單抗與T 細胞表面CD3
分子特異性結合后，可引起CD3 分子胞漿區ITAM 基序中酪氨酸的磷酸化，進而導致T 細胞增殖和活化的下游信號的激活，從而使T
細胞增殖和活化。也就是說，CD3 激發型單抗能夠模擬抗原與TCR/CD3 復合物的識別和激活過程，從而引起T 細胞的增殖與活化，因此是CIK
細胞培養中不可或缺的刺激因素。
此外，CD3 激發型單抗在選用時一定要注意克隆號。研究表明，僅克隆號為OKT-3
的CD3 激發型單抗可以刺激所有人的T 細胞的增殖，而其它克隆號的CD3 激發型單抗
僅能刺激一部分人的T 細胞。因此，在進行CIK 培養時，最好選用OKT-3 克隆，以保
證每個患者的T 細胞均能被激活。