實驗概要
本實驗制備了抗綿羊紅細胞 (SRBC)的免疫血清并對其效價進行了測定。
實驗原理
1. 制備免疫血清的傳統方法是將抗原注入動物體內，由動物體內 B 細胞增殖分化成漿細胞產生抗體。由于抗原分子（完全抗原）具有多種抗原決定簇，每一種抗原決定簇可以激活具有相應抗原受體的 B 細胞系產生該決定簇的抗體，因此用抗原免疫機體獲得的免疫血清一般均為多克隆抗體。
制備的免疫血清的質量（特異性、親和力及效價高低）受多種因素的影響，只要包括抗原的性質、免疫動物的種類及狀態、免疫劑量、免疫途徑及免疫方案（加強免疫次數，間隔時間，佐劑的使用等）等。因此要獲得高質量的免疫血清需先通過預實驗摸索確定最佳免疫方法。
2. 測定免疫血清中抗體效價的方法很多，如凝集實驗，沉淀實驗、溶血實驗， ELISA 等均可用于對抗體效價的測定，本次實驗將采用溶血實驗測定所獲得的免疫血清的效價。
該方法的基本原理是根據補體的經典激活途徑，即當抗原抗體復合物存在時，補體系統被激活，最后形成的攻復合體可使細胞性抗原溶解。當實驗中抗原和補體的量固定不變，且對于抗體相對過量時，則隨著抗體量的不同，被溶解的細胞性抗原的量也不同，兩者成正比關系，因此根據溶解的抗原的多少就可以判斷出抗體的量。
主要試劑
1. 20% SRBC
2. 抗凝劑（枸櫞酸鈉或肝素）
3. 補體
4. 生理鹽水
主要設備
1. 無菌 1ml 注射器
2. 試管
實驗材料
小白鼠
實驗步驟
1. 免疫動物：初次免疫小鼠為腹腔注射20%SRBC0.2ml，4天后以相同劑量、相同途徑加強免疫一次。
2. 獲得免疫血清（漿）：小鼠初次免疫7天后，摘眼球取血，收入加有抗凝劑的小試管中，2000轉/分離心1分鐘，上清即為免疫血漿。
3. 將前面獲得的小鼠抗 SRBC 免疫血漿首先稀釋 10 倍，成為 1:10 免疫血漿。
4. 取3個試管，分別編號為A、B、C，用于對1:10免疫血漿的3倍、4倍和5倍稀釋，即A號管內為1:30的免疫血漿；B號管為1:40 的免疫血漿；C號管為1:50的免疫血漿。
5. 取 15 支試管，分為A、B、C三列，每列5只，先給每管中加入生理鹽水0.5ml，再從A、B、C號管中分別吸取0.5ml血漿加入相應各列的第一個管中，然后各列再進行倍比稀釋，血清稀釋度如下表：
管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
A 列 | 1:60 | 1:120 | 1:240 | 1:480 | 1:960 |
B 列 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | 1:1280 |
C 列 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:1600 |
注意每列的最后一管應該棄去0.5ml液體。
6. 向每個試管中分別加入SRBC0.25ml和補體0.25ml 。
7. 混均各管中的液體，置37°C水浴30~40分鐘。
8. 結果判定
以發生完全溶血的最高血清稀釋度管為效價判定管，其血清稀釋度即為免疫血清的效價。
注意事項
1. 動物免疫時注意確保SRBC被注射到了腹腔中，要避免注入其他臟器（如腸、膀胱）內。
2. 稀釋血清時盡量做到精確，注意用于不同列的吸管不要混用。