五、結果鑒定
以雙相瓊脂擴散試驗測定所獲免疫血清的抗體效價，并用瓊指免疫電泳鑒定免疫血清中抗體的質量，應產生單一的沉淀弧線。鑒定方法的具體步驟參見有關部分。
六、材料
(一) 動物：健康成年家兔，雄性，體重2~3公斤。
(二) 器材：剪刀、鑷子、注射器(2ml、50ml)附針頭(9號、6號)、稱量瓶(10ml)、量筒、動物固定架、滅菌三角燒瓶(200ml)、手術器械一套、血管夾、黑絲線、塑料放血管等。
(三) 試劑
1.滅菌生理鹽水；
2.純化人IgG(10mg/ml)；
3.消毒酒精及碘酒；
4.羊毛脂；
5.石蠟油；
6.活卡價苗(BCG)(75mg/ml)；
7.弗氏不完全佐劑(FIA)制備：稱羊毛脂10克，逐滴加入優質石蠟油40ml，邊滴邊研磨，分裝于疫苗瓶中(每瓶10ml)，高壓滅菌(8磅20分鐘)后保存備用。
8.弗氏完全佐劑乳化抗原(FCA-IgG)的制備：將FIA予溫(60℃30分鐘)，吸取3ml于研缽中，逐滴加入活BCG(75mg/ml)0.5ml及純化人IgG2.5ml(2.4mg/ml)牨_滴入邊研磨直至形成均一性的乳狀液，取1滴滴于冷水面上不散開為合格。
七、注意事項
1.免疫用實驗動物的抗體反應性個體差異性較大，因此免疫時至少應選用兩只以上動物。另外，不能使用妊娠動物。
2.免疫用的抗原必須經FCA或FIA充分乳化后才能注射，否則將明顯影響抗原的免疫效果。上述制備乳化抗原的方法較費時、費力。采用H-81微型振蕩混合器法或三腔管研磨法制備。前者是將抗原液與佐劑按比例混合后，置于混合器上使之劇烈振蕩(頻率2900轉/分，振幅6mm)；后者是將免疫用的佐劑和抗原液按比例混合后，吸入注射器內再將注射器連接于三腔管上反復抽吸研磨。這兩種方法約1小時即可使抗原充分乳化。
3.佐劑一方面可提高特異性免疫反應的效果獲得高效價的免疫血清，但若抗原不純時，可使抗原中極微量的污染物(0.005mgN)產生抗體，以致導致免疫血清的純度受到影響。另外，有些實驗動物種系對BCG過敏，尤其是豚鼠其次是家兔，當再次注射完全佐劑時，可以引起變態反應而導致免疫失敗。為此，第二次免疫注射時應減少佐劑中BCG的含量或改用不完全佐劑，以減少和防止變態反應的發生。
4.抗原的劑量決定于抗原的種類。對免疫原性強的抗原劑量應相別較少，免疫原性弱的抗原劑量可相對較多。抗原的用量一般以體重計算。在使用佐劑的情況下，一次注入的總劑量以0.5mg/kg體重為宜。如不加佐劑時劑量可加大10倍。另外，免疫周期長者可少量多次注射，免疫周期短者可較大量少次注射。
5.免疫方法上也可采用多點注射法免疫動物。即于家兔脊柱兩旁選4-6點皮下注射，同時于兩側肩部(或臂部)和鼠蹊部各注一處。每點注0.2ml，間隔2周后再于上述部位選不同點同上注射，也可產生高效價的免疫血清。