免疫酶標技術——間接法

抗體

PBSH2O2血清

顯微鏡

1.  標本固定；

2.  PBS洗滌2×3 分鐘；

3.  1 %H₂O₂（或1 %H₂O₂甲醇）抑制內源性過氧化物酶，室溫10～20 分鐘；

4.  正常血清（1：10）孵育，室溫20 分鐘；

5.  滴加第一抗體，37 ℃1 小時或4 ℃過夜；

6.  PBS洗3×3 分鐘；

7.  滴加酶標二抗，室溫一小時；

8.  PBS洗3×3 分鐘；

9.  0.04 %DAB+0.03 %H₂O₂顯色5～10 分鐘；

10.  充分水洗后，復染、脫水、透明、封片、鏡檢。

間接法比直接法敏感，能增加染色強度，操作也較簡便。缺點是非特異染色較重，敏感性較低。