實驗概要
本實驗介紹了兔紅細胞玫瑰花環試驗操作流程。玫瑰花環試驗,又稱為花結試驗。是測定淋巴細胞數量和功能的一種方法。
人類T和B淋巴細胞表面具有不同的受體。由于人類T淋巴細胞表面具有與綿羊紅細胞結合的受體,能與綿羊紅細胞非特異性結合,形成E花環,因此,T細胞也成為紅細胞花瓣形成細胞。根據E—玫瑰花環形成率,可以間接判斷機體細胞免疫力。目前,已廣泛應用于臨床,作為測定人群免疫狀態的一個指標。
主要試劑
1. 肝素(100單位/毫升)
2. 0.5%兔紅細胞懸液(用Hanks液配制)
3. 吸收過的胎牛血清:
取經56℃30分鐘加熱滅活后的胎牛血清加半量壓積兔紅細胞混合后,37℃水浴20分鐘,2000轉/分離心10分鐘,取上清液即成。
4. Hanks液
5. 豚鼠抗凝血
6. 淋巴細胞分層液
主要設備
滅菌注射器,針頭,試管,吸管等。
實驗步驟
1. 淋巴細胞提取
1) 取豚鼠抗凝血2毫升,加3毫升Hanks液使之稀釋。加于3毫升淋巴細胞分層液液面之上(沿管壁輕輕加入,勿使兩液相混)。
2) 2000轉/分離心30分鐘,吸淋巴細胞層到另一試管中加5倍體積的Hanks液洗1-2次,(1500轉/分離心10分鐘)棄上清即成。
2. 加吸收過的胎牛血清0.1毫升,0.5%兔紅細胞懸液0.2毫升,于淋巴細胞中。混合后,37℃水浴5分鐘。
3. 500轉/分離心5分鐘,放4℃冰箱中2小時后,棄大部分上清。
4. 染色及觀察
輕輕懸浮沉積的細胞。向懸液中滴一滴美蘭液,混合,10分鐘后取一滴放載玻片上,加蓋玻片鏡檢。
高倍鏡或油鏡下計數200個淋巴細胞,凡結合3個或3個以上的兔紅細胞者為陽性,計算花環形成細胞的百分率。