兔膠體金檢測技術是用金屬離子和金屬蛋白復合物應用免疫組化原理檢測組織內抗原抗體的技術,常用膠體金(鐵、汞等)重金屬離子。由于膠體金容易制成各種大小的顆粒且有很高的電子密度及分辨率,又不影響抗體的活性,因此既可用于免疫組化又適于免疫電鏡技術。
免疫金銀法(IGSS)操作流程
1、脫蠟至0.05mol/LTBSpH7.4緩沖液。
2、抗原修復。
3、1%卵蛋白(EA)15min,不洗。
4、特異性免疫抗體37℃120min或4℃20小時。
5、0.05MTBS洗后改0.02MTBS(0.1%BAS)洗10min。
6、1%卵蛋白(EA)15min,不洗。
7、PAG(1:15)(10nm)室溫孵育60min。
8、1%戊二醛10min;雙蒸水洗5min。
9、1%明膠洗5min;銀避光顯影8-15min;雙蒸水洗15min。
10、用固定液(15%硫酸鈉、20%硫代硫酸鈉混合液)固定5min。
11、1%戊二醛固定5min;溫水洗。
12、核固紅或甲基綠襯染,常規脫水封片。
結果:陽性物質呈黑色或黑褐色顆粒。