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  • 發布時間:2019-05-10 17:19 原文鏈接: 全自動加樣系統造成ELISA實驗拖帶現象分析

    全自動加樣系統在血站的使用日趨普及,但目前使用的多為固定加樣針,這樣分配位置在前的樣本會使其后的樣本出現不同程度的污染,引起假陽性或假陰性,也就是通常所說的拖帶現象。拖帶現象會導致大量標本待檢或試驗重做,這樣不但增加了工作量,浪費試劑,更為嚴重的是有可能導致陽性標本的漏檢,影響檢驗質量。現將本站43 242份標本的檢測情況作回顧性分析,以尋求有效的解決拖帶現象的方法。

      1材料與方法

      1.1標本來源43 242份標本均為本站無償獻血者現場留樣抗凝標本。 本文來自檢驗地帶網

      1.2拖帶現象的識別通常做酶免實驗的96孔微板8行以A~H標示、12列以1~12標示。根據全自動加樣系統的分配規律,運行方向是以微板從左到右,即從第1列開始,每次加8孔。ML-STAR有三組鋼針,每組8根針,通過循環輪換三組鋼針模式實現樣本的批處理;Freedom EVO Clinical 200只有一組8根鋼針。如果陽性(特別是強陽性)標本后經同一根針所加標本出現一個或多個連續陽性,比如用ML-STAR加樣,如果A1陽性,A4或后面每隔2孔也是陽性;若是用Freedom EVO Clinical 200加樣,如果A1是陽性,A2或后面的板孔也是陽性,且越往后反應強度越弱則懷疑是拖帶所致。

      1.3儀器與試劑Freedom EVO Clinical 200全自動加樣系統(瑞士TECAN)、ML-STAR全自動加樣系統(瑞士HAMILTON);HBsAg試劑盒由廈門新創和北京萬泰提供,抗-HCV試劑盒由北京萬泰和北京金豪提供,抗-HIV試劑盒由珠海麗珠和北京金豪提供,TP抗體檢測試劑盒由北京萬泰和廈門新創提供。

      1.4實驗方法按照試劑說明書要求編制加樣程序,初、復檢四項的加樣順序為HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、TP,先加初檢,后加復檢,最后加對照。對疑似拖帶現象導致假陽性的標本挑出原試管和小辮進行復檢,經手工加樣雙孔復試為陰性則證實為拖帶所致的假陽性。

    2結果

      本組43 242份標本中因拖帶現象引起的假陽性結果,見表1。表1拖帶現象導致的假陽性結果有報道[1]稱污染現象與實驗中加樣程序的先后順序有關,TP加樣順序在后,所以出現前排孔陽性污染后排孔的現象以TP多見。本組結果顯示,造成拖帶現象最嚴重的是抗-HIV,抗-HCV和TP也常見。而HBsAg采血前雖經金標試劑篩查,仍有不少漏檢,其中不乏HBsAg強陽性者,但因拖帶導致HBsAg假陽性則罕見,是與檢測試劑的靈敏度有關,還是因為絕大多數獻血者血液中含有抗-HBs所致,或者是別的原因,值得進一步探討。筆者通過觀察發現,陽性反應越強拖帶越嚴重,抗-HIV最多連續拖帶達8孔,同時發現同一項目不同廠家的試劑拖帶程度不同,這可能也跟檢測試劑的靈敏度有關。另外一個有趣的現象是,因抗-HIV陽性而造成后面拖帶的百分之百都是HIV確證陽性,而抗-HIV假陽性哪怕反應有多強都不會引起拖帶現象。 檢驗地帶網

      3討論

      對于全自動加樣系統所出現的拖帶現象,有報道用改變沖洗方式[2]或定期用HCl和NaOH沖洗和浸泡加樣器的管道等方法來解決[3],但筆者認為最好的解決辦法是使用一次性加樣針,這才是最根本的解決辦法。在沒有改用一次性加樣針的情況下,遇到拖帶現象則應將被污染的標本重新取樣進行再檢,以避免假陽性的產生,而因拖帶所致的HBsAg假陰性則難以避免,因為如果拖帶抗-HBs會中和HBsAg。現在有的血站利用全自動加樣系統進行同步留樣保存標本[4],如果用的還是固定加樣針,肯定會造成樣本之間的交叉污染,這樣的留樣就會失去其意義,所以說使用一次加樣針是勢在必行。實踐證明本站最近Freedom EVO Clinical 200全自動加樣系統采用一次性加樣針已無拖帶現象出現。


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