在使用全自動生化分析儀的過程中,我們經常會遇到這樣的情況:單獨做某個項目時結果沒有問題,可是將它與某些項目組合在一起時,結果卻出現異常。其中的原因是全自動生化分析儀的清洗系統隨著儀器使用時間的累加,清洗效果逐漸下降,試劑交叉污染的程度增加所致。全自動生化分析儀各試劑間的相互干擾影響到了檢驗結果的準確性和可靠性,給檢驗結果帶來很大的偏差,有時甚至會誤導臨床醫生,延誤患者的病情,造成嚴重后果。因此避免試劑間的干擾,在日常生化檢驗工作中也就非常重要和迫切。
一、試劑間相互干擾的類型
試劑中含有下一個檢測所要測定的底物,或是含有的某種試劑成分與下一反應的底物有作用,因而直接干擾下一反應的測定結果;另一種原因是該試劑所引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接的干擾,因為在有試劑污染的情況下,下一個測試所測定的是前后兩個項目反應的綜合作用結果。部分已知的常用試劑間可能產生的相互干擾如下:
1.pH值改變:試劑中反應緩沖液之間因儀器攜帶污染而使下一反應的pH值改變,使下一反應達不到最佳狀態。如雙縮脲法測血清總蛋白,若其他條件相同,反應在堿性(pH值8~9)條件時,蛋白肽鍵(—CONH)才都能與堿性銅溶液作用生成紫色反應,完全測出血清蛋白的總量。若pH<8時,總蛋白測定結果偏低,直接影響球蛋白、白蛋白/球蛋白的結果。酶活力測定在最適pH值時,反應最快,靈敏度最高,但是因為緩沖能力有限,可因攜帶污染使酶促反應出現無效值。大多數酶反應pH值在6.0~7.5之間;ALP、γ-GT、LDH須在堿性條件下最適宜。
2.TG、T-CH、UA、MG試劑中含有膽酸鹽,對循環酶法測定膽汁酸能產生嚴重干擾[1]。
3.ALT(IFCC)、AST(IFCC)試劑中含有高活力LD成分,有可能會對LD的測定帶來干擾。
4.CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)試劑中含有Glu成分,其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應過程,因此可能對Glu測定帶來干擾,尤其對Glu的HK法測定可能帶來嚴重干擾。
5.Glu(HK)、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)、TG、HDL-C、LDL-C(直接法)等試劑中使用了鎂鹽,可能會對其后的Mg2+ 測定帶來干擾[2];TP試劑中高濃度的Cu2+對Mg2+測定也會產生干擾[3]。
6.ALT、AST、LDH、CK、CK-MB、UA、r-GT、TP,LDH等試劑由于試劑中含有K+或者與K+的酶法測定有相同或相反的進程,對K+的酶法測定產生干擾[4]。
7.ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、 α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液,可能會對無機磷的測定帶來干擾。
8.Mg2+試劑 (Calmagite)中含有EGTA成分,為Ca2+絡合劑,可能對Ca2+的測定帶來干擾[5]。
9.CK檢測不應在ALP、Ca檢測之前,因CK反應液中加入EDTA-Na,能抑制ALP活性,結合Ca而使結果偏低。
10.BUN酶法測定因谷氨酸脫氫酶(GLDH)消耗NADH,不能放在底物NADH如ALT、AST項目前檢測。
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