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  • 發布時間:2020-07-06 10:42 原文鏈接: 全血基因組DNA提取試劑盒(50次)使用說明

    全血基因組DNA提取試劑盒(50次)
    試劑盒組成:
    1.溶液A 25ml 5×STMT(用時按體積比1:4 用滅菌雙蒸水稀釋)
    2.溶液B 17ml
    3. 溶液C 0.6ml RNase A
    4.溶液D 44ml
    5. 溶液E 1.25ml Resin(用時充分混勻)
    6. 溶液F 30ml 洗液(用時加入40ml無水酒精,并在瓶蓋“口”中做標記)
    7.溶液G 5ml TE 緩沖液
    實驗步驟:
    (一)新鮮抗凝血或冷凍抗凝血
    1.取300μl 全血,加入900μl 溶液A,溫和混勻5~6 次。
    2.室溫或冰浴10min,≥8000rpm 離心20~30 秒,棄上清。
    注:1)若紅細胞溶解不完全,則沉淀物發紅,可再加900μl 溶液A,重復上述步驟一次。
    2)若全血在使用之前被冷凍,則需重復步驟1、2 兩次。
    3.加入300μl 溶液B,溫和振蕩或反復用移液器吸打白色沉淀物4~6 次,
    加入10μl 溶液C,室溫放置10min。
    4.加入800μl 溶液D,20μl 溶液E,混勻,室溫放置5min。
    5.≥8000rpm 離心30s,棄上清。
    6.加入500μl 溶液F,充分混勻,≥8000rpm 離心30~60s,棄上清。
    7.重復步驟6。
    8.≥12000rpm 離心1min,吸干剩余液體。室溫放置5~10min。
    9.加入50~100μl 溶液G,混勻,50℃保溫5~10min,≥12000rpm 離心1min,吸取上清,
    即為DNA。
    (二)分離好的白細胞
    1.取100μl 白細胞,按1:3 的比例直接加入溶液B,充分混勻,加入10μl 溶液C,室溫
    放置10min。
    2. 其余接(一)的步驟4。
    注注意事項:
    1. 用戶可視DNA 濃度高低,適當調整溶液G 的量。
    2. 此方法提取DNA 質量非常高,適用于分子生物學任何實驗要求,OD260/280≥1.5,一
    般情況能達到1.7--1.8,若比值偏低,可能是溶血或儲存時間過長。

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