所有操作均在超凈工作臺上進行。
1．原生質體的分離和收集。
2．將收集的兩種不同材料的原生質體分別懸浮在0.16mol/L的CaCl2·2H2O（pH5.8~6.2）原生質體密度調整為2×105/ml左右（用血細胞計數板統計原生質體密度）。
3．將兩種原生質體懸液等量混合。
4．用刻度吸管將混合的原生質體懸液滴在直徑為60mm的平皿中，每皿滴7~8滴，每滴約0.1ml。然后靜置10in，使原生質體巾在皿底上，形成一薄層。（應有3~5個平皿的重復）。
5．用吸管將等量的PEG溶液緩慢地加在原生質體液滴上，再靜置10~15min。此時可取一個平皿在倒置顯微鏡上觀察原生質體間的粘連。
6．用刻度吸管向原生質體液滴慢慢地加入高pH、商鈣稀液。第一次加0.5ml，第2次1ml，第3、4次各2ml，每次之間間隔5min。
7.將平皿稍微傾斜，吸去上清液，再緩緩加入4ml稀釋液。5min后，再傾斜平皿，吸去上清液注意吸去上清液時勿使原生質體漂浮起來。
8.用DPD培養基如上法換洗二次。
9.每平皿中加培養基2ml，輕輕搖動平皿。
10.用蠟膜密封平皿。置260下進行24h暗培養，然后轉到弱光條件下培養。