成人每日150～200mg，早晨空腹一次服用。兒童接3～4mg/kg，一次服用。治療肺結核病的療程為1/2～1年。眼部感染采取局部用藥（滴眼劑濃度0.05%）。
⑴利福定應于空腹時（餐前1小時或餐后2小時）用水送服以保證最佳吸收。如出現胃腸道刺激癥狀則可在進食時服用。
⑵利福定單獨用于治療結核病時可能迅速產生細菌耐藥性，因此該品必須與其他抗結核藥合用。治療可能需持續1一2年，甚至數年或長期服藥。利福定與異煙肼間歇療法曾成功地用于結核病的治療，用法為采用兩者常用劑量每日給藥，連續1個月，繼以利福定0.6g，與異煙肼0.9g，每周2次，但間歇療法的副作用可能較多見且嚴重，尤其當利福定的劑量較大時（0.9一1.2g，每周2次）。
⑶肝功能減退的患者常需減少劑量，每日按體重不超過8mg/kg。
⑷腎功能減退者不需減量。此外，在腎小球濾過率減低或無尿患者中利福定的血藥濃度無顯著改變。發生急性腎功能衰竭時提示利福定有誘發過敏性間質性腎炎的可能。
⑸利福定可能引起白細胞和血小板減少，并導致齒齦出血和感染，愈合延遲等。此時應避免拔牙等手術，并注意口腔衛生，刷牙及剔牙均需謹重，直至血象恢復正常。服藥后尿、唾液、汗液等排泄物均可顯桔紅色。