1.材料
(1)微量培養盤,盤內各孔于克隆化前一天培養小鼠腹腔細胞(即飼養細胞)每孔2萬~4萬。
(2)HT培養基
2.操作方法
(1)取出抗體陽性孔細胞,用HT培養液制成細胞懸液。并取樣進行臺盼蘭染色,計數。
(2)用HT培養液將細胞稀釋成200個/ml、40個/ml、20個/ml和的懸液。
(3)用吸管將細胞懸液分別種入微量培養盤,每孔0.05ml,細胞含量分別為10個/孔、2個/孔、1個/孔和0.5個/孔。
(4)5%CO2飽和濕度,37℃培養。
(5)每天用倒置顯微鏡觀察克隆生長情況,選擇只有一個集落生長的孔,棄掉兩個以上和沒有細胞生長的孔。
(6)克隆大量繁殖后,布滿孔底的1/3~1/2時,測培養液抗體。
(7)抗體陽性孔細胞,移到有飼養層的組織培養瓶中,并傳2~4代就可以脫離飼養細胞,建成克隆株。