對于單點突變,Stratagene公司的QuikChange Site-directed Mutagenesis kit是不錯的選擇,通過巧妙設計,將質粒定點突變技術變得簡單有效。準備突變的質粒必須是從常規E.coli中經純化試劑盒(Miniprep)或者氯化銫純化抽提的質粒。設計一對包含突變位點的引物(正、反向),和模版質粒退火后用PfuTurbo聚合酶“循環延伸”,(所謂的循環延伸是指聚合酶按照模版延伸引物,一圈后回到引物5’端終止,再經過反復加熱褪火延伸的循環,這個反應區別于滾環擴增,不會形成多個串聯拷貝。)正反向引物的延伸產物退火后配對成為帶缺刻的開環質粒。DpnI酶切延伸產物,由于原來的模版質粒來源于常規大腸桿菌,是經dam甲基化修飾的,對DpnI敏感而被切碎(DpnI識別序列為甲基化的GATC,GATC在幾乎各種質粒中都會出現,而且不止一次),而體外合成的帶突變序列的質粒由于沒有甲基化而不被切開,因此在隨后的轉化中得以成功轉化,即可得到突變質粒的克隆。這個試劑盒非常巧妙的利用甲基化的模版質粒對DpnI敏感而合成的突變質粒對DpnI酶切不敏感,利用酶切除去模版質粒,得到突變質粒,使得操作簡單有效。另外由于Pfu聚合酶是公認的最好的高保真聚合酶之一,堪稱高保真聚合酶的“黃金標準”,是Stratagene的看家之寶,能夠有效避免延伸過程中不需要的錯配。試劑盒采用的是低次數的循環延伸而非PCR,有助于減少無意錯配。只需要一次酶切和轉化,實驗可以在一天完成。這個試劑盒適用于質粒大小不超過8Kb的質粒。后來推出的QuikChange XL site-directed mutagenesis kit則是針對大于8Kb的質粒的定點突變的,通過優化試劑特別是其感受態細胞(XL10-Gold),使得較大的質粒的定點突變也一樣簡單。QuikChange由于操作簡單快速,效率高( >80%)而受到普遍歡迎,光是2012年的前9個月就有超過400篇發表的論文中用到這個產品。