5′-核苷酸酶（EC3．1．3．5）可作用于腺苷（次黃苷）-5′-磷酸，而對3′-磷酸則無作用。含于前列腺、精液、腦、網膜、蛇毒、馬鈴薯、酵母和大腸桿菌中。除大腸桿菌的胞周腔（periplasmic space）中存在這種酶可作為典型例子以外，在高等動物細胞中，通常也是與膜結構相結合而存在。3′-核苷酸酶（EC3．1．3．6）可以水解腺苷-3′-磷酸等，存在于麥芽、馬鈴薯和枯草桿菌中。
