1.流行病學病史
有不安全的性接觸史；孕產婦梅毒感染史；輸注血液史。
2.臨床表現
有各期梅毒相應的臨床表現。如為潛伏梅毒則無明顯臨床表現。
3.實驗室檢查
（1）暗視野顯微鏡檢查 取患者的可疑皮損（如硬下疳、扁平濕疣、濕丘疹等），在暗視野顯微鏡下檢查，見到可運動的梅毒螺旋體，可作為梅毒的確診依據。
（2）梅毒血清學試驗 梅毒血清學試驗方法很多，所用抗原有非螺旋體抗原（心磷脂抗原）和梅毒螺旋體特異性抗原兩類。前者有快速血漿反應素環狀卡片試驗（RPR）、甲苯胺紅不加熱血清學試驗（TRUST）等，可做定量試驗，用于判斷療效、判斷病情活動程度。后者有梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）、梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）等，特異性強，用于TP感染的確證。
梅毒螺旋體IgM抗體檢測：感染梅毒后，首先出現IgM抗體，隨著疾病發展，IgG抗體隨后才出現并慢慢上升。經有效治療后IgM抗體消失，IgG抗體則持續存在。TP-IgM抗體不能通過胎盤，如果嬰兒TP-IgM陽性則表示嬰兒已被感染，因此，TP-IgM抗體檢測對診斷嬰兒的胎傳梅毒意義很大。
（3）腦脊液檢查 梅毒患者出現神經癥狀者，或者經過驅梅治療無效者，應作腦脊液檢查。這一檢查對神經梅毒的診斷、治療及預后的判斷均有幫助。檢查項目應包括：細胞計數、總蛋白測定、RPR及TPPA試驗等。
