配制培養基
(1)愈傷組織誘導培養基: MS 培養基(蔗糖含量為 10 g/L ,2,4 – D 含量為 2 mg/L,瓊脂10 g/L)。
(2)試驗培養基:在 MS 培養基中加入 IAA 和 6–BA 。
吲哚乙酸(IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解, 6 -芐基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解,然后用蒸餾水稀釋,再加入培養基中。
儀器設備
培養室,高壓滅菌鍋,水浴鍋,解剖刀,三角燒瓶(100mL),燒杯,量筒,組培瓶,組培蓋或封口膜,棉線,接種箱或超凈工作臺,分析天平,長鑷子,槍狀鑷子,剪刀,容量瓶,移液管,牛皮紙。
培養基滅菌
將配好的培養基加入瓊脂加熱溶解,調至 pH 5.6~5.8,趁熱分裝于 100 mL組培瓶中,每瓶約 30 mL 。待培養基冷卻凝固后,蓋上組培蓋,或蓋上封口膜并用棉線扎牢,然后在高壓滅菌鍋中 121 ℃( 1 kg/c㎡)下滅菌 20 min 。取出組培瓶放在臺子上,冷卻后備用。接種操作所需的一切用具(如長鑷子、解剖刀、剪刀等)及滅菌水,需同時滅菌。