關于氯化三苯基四氮唑法的方法介紹

發布時間：2024-08-20 08:45 原文鏈接：關于氯化三苯基四氮唑法的方法介紹

　　1、氯化三苯基四氮唑法— 定性測定

　　（1）配置反應液把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸鈉和磷酸緩沖液按1:5:4比例混合。

　　（2）把根仔細洗凈，把地上部分從莖基切除，將根放入三角瓶中，倒入反應液，以浸沒根為度，置37℃左右暗處放1h，以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細側根都明顯地變成紅色，表明該處有脫氫酶存在。

　　2、氯化三苯基四氮唑法— 定量測定

　　（1）TTC標準曲線的制作

　　吸取0.25ml 0.4%TTC溶液放入10ml容量瓶，加少許Na2S2O4粉末，搖勻后立即產生紅色的TTF。再用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻。然后分別取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標準比色系列，以空白作參比，在485nm波長下測定光密度，繪制標準曲線。

　　（2）稱取根樣品0.5g，放入小培養皿（空白試驗先加硫酸再加入根樣品，其他操作相同），加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml，把根充分浸沒在溶液內，在37℃下暗處保溫1h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反應。

　　（3）把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把紅色提出液移入試管，用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌二至三次，皆移入試管，最后加乙酸乙酯使總量為10ml，用分光光度計在485nm下比色，以空白作參比讀出光密度，查標準曲線，求出四氮唑還原量。

　　（4）計算

　　將所得數據帶入下式，求出四氮唑還強度。

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