鹼性磷酸酶試驗是檢驗精斑的一種預試驗。精液中含有大量酸性磷酸酶，而其他體液分泌液中含量很少。酸性磷酸酶在適當溫度和酸性溶液中，能使磷酸苯二鈉分解，產生萘酚，萘酚經鐵氰化鉀作用與氨基安替比林結合，產生紅色醌類化合物。檢材若為精液，滴加試劑后立即出現淺紅色至深紅色反應，顏色深淺因精斑濃度而異，若濃度過高，可出現紅色沉淀。此反應可檢驗陳舊腐敗的精斑和無精子精斑，靈敏度極高，只要微量精液或含小童酸性磷酸酶物質，就可呈陽性反應。
故檢驗時應法意其他分泌液（鼻液、唾液、汗、尿等）的干擾而出現假陽性反應。也可將檢材浸液與已知酸性磷酸酶作比色測定，若檢材中的酸性磷酸酶濃度大于300單位/毫升，可推測為精斑，如大于500單位殆無其他斑痕的可能性，但仍不能取代精子的檢出。對于酸性磷酸酶試驗的評價，國內外法醫界有不同意見，一種認為只能作預試驗，一種認為可以作為定性試驗。