色譜柱是高效液相的心臟,大部分色譜譜圖問題都來自于色譜柱,色譜填料的主要用途是對混合物質進行分離,然后通過后處理以達到對各組分進行定性和定量.
常見色譜填料 有以下幾個分類
1、 反相(與離子對)方法(填料為非極性)
C18(十八烷基或ODS)----------- 普適性好;保留性強,用途廣
C8(辛基) -----------與C18相似,但保留值稍小
C3,C4 -----------保留值小;大多用于肽類與蛋白質
C1【三甲基硅烷(TMS)】------保留值最小;最不穩定
苯基,苯乙基 -----------保留值適中;選擇性有所不同
CN(氰基) -----------保留值適中;正相和反相均可使用
NH2(氨基) -----------保留性弱;用于烴類;欠穩定
聚苯乙烯基b -----------在1<PH<13的流動相中穩定;對某些分 離峰形好,柱子壽命長
2、 正相方法(填料為極性的)
CN(氰基) -----------普適性好;極性適中;用途廣
OH(二醇基) -----------極性大于CN
NH2(氨基) -----------極性大,欠穩定
硅膠b ------------普適性好;價廉;操作欠方便;用于制備LC
3、 空間排阻方法
硅膠b -----------普適性極好;作吸附劑用
硅烷化硅膠 -----------吸附性弱,溶劑兼容性好;適用于有機溶劑
OH(二醇基) ------------欠穩定;在水SEC中使用(凝膠過濾)
聚苯乙烯基b ------------廣泛用于有機SEC(凝膠滲透);一般與水和極性大的有機溶劑不相容
4、 離子交換方法
鍵合相 ------------穩定性與重現性均不好
聚苯乙烯基b -------------柱效不高;穩定;重現性好
一般無特別說明反相方法填料都是指硅膠基質鍵合相,而以硅膠為基質鍵合的C18填料在反相色譜中發揮著巨大作用,它可完成高效液相色譜70~80%的分析任務, 因為有著較高的碳含量和更好的疏水性,對各種類型的生物大分子有更強的適應能力,因此在生物化學分析工作中應用的最為廣泛。
ODS,octadecyl silane的縮寫,即十八(烷)基硅烷,是以硅膠為基質鍵合的C18填料,所以ODS-C18通常簡稱C18,而因為C18用于反相色譜,也即RP-C18。
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