1、產后新鮮臍帶,無菌剪取 10—15 厘米長一段,如不能立即培養,可于 12 小 時內保存于 4℃。
2、用三通注射器吸取溫 PBS 液注入臍靜脈中洗去殘血,在入口處用線繩扎緊, 以防液體返流。
3、用血管鉗夾緊臍帶一端,從另一端向臍靜脈中徐徐注入濃度為 0.1%的粗制膠原酶,充滿血管,消化 3—10 分鐘;注入口用線繩扎,以防液體返流。
4、吸出含有內皮細胞的消化液,于離心管中,注入溫 PBS 輕輕反復沖洗后,一 并注入離心管中(此步驟可重復) 。
5、離心去上清,加入RPMI1640培養液制成細胞懸液,接種入培養器皿中,置溫 箱培養。兩至三天可見細胞長成單層。
神經細胞(神經元)不易培養,只有在適宜情況下,如接種在膠原底層上,或加入神經生長因子和膠質細胞因子時,可出現一定程度的分化,長出突起等現象, 但很難使之增殖。而神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養的成分。人、鼠等腦組織即可用于神經膠質細胞培養,不僅能獲得生長的膠質細胞,也可形成能傳代的二倍體細胞系。一般說來,膠質細胞在培養中生長不穩定,不易自發轉化,但對外界因素仍保持很好的敏感性,可用 ROUS病毒和SV4等誘發轉化。