1. 將一個50 ml 硬質玻璃燒杯浸入盛有液氮的燒瓶（或敞口聚苯乙烯盒）中冰凍，燒杯中加CryoKwik（或異戊烷）。
2. 在濾紙條一端以鉛筆注明標簽，用鑷子將樣品放于另一端。 3. 保證CryoKwik 呈液狀（必要的話，通過接觸一熱的金屬棒使其熔化），將樣品浸于冷的CryoKwik 中1 min。 4. 置帶樣品的濾紙條于冰凍切片儀的樣品槽中，并固定在有一薄層OCT化合物的切片托盤上。 
圖一、切片程序
5. 將冰凍切片儀中的樣品切片托盤放入預冷的加熱槽中或CO2噴射型冰凍器中冰凍，直至OCT化合物凝結，并在冰凍切片儀中放置10 min 以上，使溫度均衡。
6. 用一預冷的剃須切片，將樣品塊修成梯形（在不會影響樣品形態情況下），撕去濾紙。
7. 將切片卡盤安于切片機上，使梯形的平行面與刀相齊并將寬面面向刀的邊緣，向后移動樣品塊使其恰好可切過刀邊。
8. 用刀快切，在樣品塊上修整出“光面”（每秒切出一張切片’厚約5~10 μm）。待已切至組織樣品，從切面上可看到所要切的組織結構或樣品塊大小理想時（一邊在0.5~1 cm之間），便可收集切片，按步驟9進行切片的收集（滾板法）。
9. 圖二所示為最常用的塑料滾板法，它很容易進行連續切片，伹對大的組織切面則不太適合（較大組織切片的收集見滾條法）。
（1）進行切片前，放下滾板使其接觸切片刀并置放在與刀邊緣平行位，從刀口稍向后移。
（2）扭動轉軸并切片，在此情況下切片將到達刀的邊緣處并停住。 （3）升起滾板，用一小毛刷，將切好的切片從切口處掃下來，降下滾板，并稍微向前推移。 （4）小重復步驟（1）~（3）直至切片平穩地滑過滾板與刀間（通常滾板在刀口前方約 0.5 mm，然后進行下一步）。
圖二、塑料滾板
10. 升起滾板，將切好的切片用一細毛刷移至刀背面，用一預先寫好標簽，溫熱的以明膠或多聚賴氨酸包被的載玻片，輕觸并載起切片。
11. 切片承于載玻片上后，用密毛刷（1/4英寸即6.35 mm）清理刀上聚集的碎冰。 12. 用毛刷清理刀時，需相當用力，而且應順著刀口，否則切片刀會很快變鈍或拫壞毛刷。 展開 | 