為了獲得較好的結果，應當用新鮮的組織，因為在-80°C 中保存超過 24 h 的樣品，其RNA 的產量和完整性將大打折扣。盡管有幾個實驗小組曾經報道用 LCM 技術從石蠟包埋的組織中獲得了沒有降解的 RNA, 但作者還是推薦使用冷凍的組織塊。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。
| 實驗材料 | 新鮮的組織 |
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| 試劑、試劑盒 | 丙酮蒸餾水干冰磷酸鹽緩沖液（PBS)Tek OCT 組織復合物 |
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| 儀器、耗材 | 封閉容器燒杯恒冷裝置解剖工具平盤組織模子載玻片刀片 |
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| 實驗步驟 | 一、材料
1. 緩沖液、溶液和試劑
丙酮
蒸餾水
干冰
磷酸鹽緩沖液（PBS)
Tek OCT 組織復合物（Sakura FinetekUSA，Torrance，CA)
2. 特殊設備
封閉容器
燒杯
恒冷裝置
解剖工具
平盤
可以削去的一次性組織模子（Pelco International，Redding，CA)
普通的無粘片劑的載玻片
Sakura 刀片（IMEB，SanMarcos，CA)
3. 細胞和組織
新鮮的組織（見二、方法中的（2））
二、方法
1. 冷凍組織的準備
(1) 蓋上盛有包埋介質的模子（推薦使用 Tek O C T 組織復合物），準備干冰-丙酮浴(在燒杯中簡單混合干冰和丙酮）。
(2) 處死動物并取出目的組織與包埋介質混合。
(3) 放組織于冷模子底上。為了便于利用恒冷裝置，反向放目的切面于冷模子底上。
(4) 將冷模子的底部放于干冰-丙酮浴的表面，這樣樣品將在 3~4 min 內逐漸冷卻。當品冷凍后將呈現白色。在冷凍時不要將模子掉入丙酮中。
(5) 從模子中移去組織，放于-80°C 直到切片。如果組織樣品放置時間較長，將其放盛有冷的蒸餾水的密封容器中以保持濕度。
2. 切片及保存
(1) 取冷凍的樣品置于含 O C T 復合物的低溫冷箱中，采用標準的冷凍組織切片法。
(2) 讓樣品與冷箱中溫度（-25~-20°C) 平衡 15~20 min。如果樣品在切片時組織塊太冷，平衡時間可以適度延長。
(3) 將準備用于 LCM 的切片（厚度 1~5um) 放于普通的無粘片劑的載破片上。如果組織粘于載玻片上太緊，可能不利于后續的 LCM 操作。
(4) 放置好后，立即放到干冰上。如果當天做 LCM，片子應當放在干冰上。否則，應儲存于-80°C。 |
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